兽医寄生虫病实验诊断技术.docVIP

当前位置：课程学习第五章 兽医寄生虫病的实验诊断技术 本章导学 主要讲述兽医寄生虫病的实验室诊断方法:粪便检查,螨病及原虫病的实验室诊断,蠕虫学剖解技术及蠕虫标本的采集。 学习重点: 掌握常见蠕虫学的实验室粪便虫卵检查技术及幼虫培养技术 学习难点: 几种实验方法的有机结合应用 1、掌握常见实验室寄生虫学诊断技术. 2、理解常见诊断技术的原理 3、查阅与寄生虫学检验相关的最新文献资料. 当前位置：课程学习第五章 兽医寄生虫病的实验诊断技术学习单元1 蠕虫病的实验诊断技术 粪便内蠕虫虫卵检查法 导言 粪便内蠕虫虫卵的检查，根据所采取的方法不同，可分为直接涂片法、漂浮法和沉淀法、以及锦纶筛兜淘洗法。 直接涂片法 直接涂片法是检查虫卵的最简单方法，但如果粪便中虫卵数量少时则不易查到。 1、取1～2滴清水，滴在载玻片； 2、然后用火柴梗或牙签取黄豆大小的粪便与载玻片上的清水混匀； 3、除去较粗的粪渣； 4、将粪液涂成薄膜，薄膜的厚度以透过涂片隐约可见书上的字迹为宜； 5、盖上盖玻片，置于低倍镜下检查。 1、涂片的厚薄以在载玻片的下面垫上有字的纸时，纸上的字迹隐约可见为宜。 2、该法简便、易行、快速、适合于虫卵量大的粪便检查，但对虫卵含量低的粪便检出率低，故此法每个样品必须检查3～5片。 3、检查虫卵时，先用低倍镜顺序观察盖玻片下所有部分，发现疑似虫卵物时，再用高倍镜仔细观察。因一般虫卵(特别是线虫卵)色彩较淡，镜检时视野宜稍暗一些(聚光器下移)。 漂浮法 漂浮法是利用比重比虫卵大的溶液稀释粪便，将粪便中比重小的虫卵浮集于液体表面。常用饱和盐水（即在1000m1沸水中加入380g食盐）做漂浮液，用以检查线虫和绦虫虫卵。此外，尚可采用其他饱和溶液，如饱和硫酸镁溶液等。 1、取粪便10g； 2、加饱和盐水l00ml； 3、用玻棒搅匀，通过60目铜筛过滤到另一胶杯中； 4、静置半小时； 5、用直经5～10mm的铁丝圈，与液面平行接触以沾取表面液膜，抖落于载玻片上，加盖玻片检查。 1、漂浮时间：饱和盐水漂浮法漂浮时间为30min左右较为适宜。时间过短(少于10min)，漂浮不完全；时间过长(大于1h)，易造成虫卵变形、破裂、难以识别。 2、漂浮液保存：漂浮液必须饱和，盐类的饱和溶液须保存在不低于13℃的情况下，才能保持较高的密度，否则效果难以保证。 3、漂浮液的选择：除饱和盐水漂浮液以外，其他一些漂浮液也可用于一些特殊虫卵的检查。如饱和硫酸锌溶液(饱和度为1 000mL水中溶解920g硫酸锌)漂浮力强，检查猪肺丝虫卵效果较好；饱和蔗糖溶液(饱和度为1 000 mL，水中溶解1 280g蔗糖)性温和，可适于多种虫卵和卵囊的漂浮。 4、漂浮法检查多例粪便时，如用铁丝圈蘸取漂浮液面，则检查完一例，再蘸取另一例时，需先在酒精灯上烧过铁丝圈后再用之，避免相互污染，影响结果的准确性。 5、静置滤液的容器选择：选用口径相当较小的类似三角瓶的器皿，如经济实惠的青链霉素瓶。 6、如用载玻片或盖玻片蘸取虫卵，则使用的载玻片或盖玻片一定要干净无油腻，否则难以蘸取。 漂浮法示意图 沉淀法 沉淀法用于检查粪便中的吸虫卵，因为吸虫卵一般来说其比重大于水，可沉集于水底。 1、取粪便5g； 2、加清水l00ml； 3、用玻棒搅匀，通过60目铜筛过滤到另一胶杯中； 4、静置半小时； 5、倾去上层液，保留沉渣； 6、再加水混匀； 7、又静置半小时； 8、再倾去上层液，保留沉渣； 9、如此反复操作直到上层液体透明，最后倾去上层液； 10、吸取沉渣检查。 1、注意此法粪量少，一次粪检最好多看几片，以提高检出率。 2、可将离心沉淀法和漂浮法结合起来应用。如可先用漂浮法将虫卵和比虫卵轻的物质漂起来，再用离心沉淀法将虫卵沉下去；或者选用沉淀法使虫卵及比虫卵重的物质沉下去，再用漂浮法使虫卵浮起来，以获得更高的检出率。 锦纶筛兜淘洗法 1、取粪便5～10g； 2、加水搅匀； 3、通过40或60目铜筛过滤； 4、滤下液再通过260目锦纶筛兜过滤； 5、在锦纶筛兜中继续加水冲洗，直到洗出液变清为止； 6、挑取260目锦纶筛兜中的粪渣抹片检查。 此法适用于宽度大于60微米球虫卵囊。因通过260目锦纶筛兜过滤、冲洗后，直径小于40微米的细粪渣和可溶性色素均被洗去而使虫卵集中。 虫卵计数法 虫卵计数法是测定每克家畜粪便中的虫卵数，而以此推断家畜体内某种寄生虫的数量方法，有时尚以使用驱虫药前后虫卵数量的对比，以检查驱虫效果。方法有多种，这里介绍目前常用的三种方法。 一、斯陶尔氏法(Stolls method) 本法适用于大部分虫卵的计数。 1、在一小玻璃容器上（如小三角烧瓶或大试管），在容量为56ml和60ml处各作一个标记； 2、先