核酸分子杂交的技术.pptVIP

9. 滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗。 10. 滴加生物素化鼠抗地高辛：37℃60分钟或20℃左右120分钟。05M PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。 11. 滴加SABC：37℃20分钟或20℃左右30分钟。0.5M PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。 12. 滴加生物素化过氧化物酶：37℃20或20℃左右30分钟。0.5M PBS洗5分钟×4次。 13. DAB显色: 使用DAB显色试剂盒1ml蒸馏水加显色剂A、B、C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。 14. 必要时苏木素更染，充分水洗。 15. 酒精脱水，二甲苯透明，封片。 二、石蜡切片 如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4％多聚甲醛/0.1M PBS（pH7.0-7.4），含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定2小时即可，较大的标本固定不要超过4小时。某些组织对过度固定大其敏感，如动物大脑，固定时间一定不要超过1小时。 1. 常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。 2. 玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。 3. 石蜡切片经常规脱蜡至水。3%H2O2室温处理10分钟。蒸馏水洗涤2次。 4. 暴