真菌α-淀粉酶产生菌的筛选及其固态发酵条件的初步研究.doc

发酵工程学科的进展 ——第四次全国发酵工程学术讨话套论文枭 真菌a一淀粉酶产生菌的筛选及其固态发酵 条件的初步研究* 李江华h2， 房 峻2 (1．江南大学教育部工业生物技术重点实验室，无锦，江苏Z14036 2．江南大学生物工程学院，无锝．江苏Z14036) 摘要：从滔曲和酒药中分离筛选出一株产r淀粉酶的菌株A019．经形态学初步鉴定为米 曲霉。研究了碳豫、氟谭、培养温度与时问等目素对A019产酶的影响．较适的培养基组成 和培养条件为t麸皮89，豆饼粉2．289，酵母膏0．19。K：HPo．·3H20 1％，MgS04·7H20 0．094％，加水量12．9mL，培养基的起始pH5．0左右，28℃培养48h，在此条件下r淀粉酶的 酶{舌达到410U／g干曲左右． 前言 中国是世界上最大的小麦生产和消费国。随着人民生活水平的日益提高和食品工 业的不断发展，人们对面粉的品种和品质提出了愈来愈高的要求。面粉生产企业为适应 市场新的需求，近年来陆续开发生产了各类专用面粉。在生产面包、馒头等制作发酵食 品的专用面粉时，除面粉的面筋、灰分、粗细度、粉质曲线稳定时间等常规质量指标外．面 粉工作者越来越关注面粉的口一淀粉酶活性。一般情况下，正常季节收获的小麦加工的面 粉中a一淀粉酶的含量普遍不足，为改善和提高面粉类食品的质量可在面粉加工的过程中 添加r淀粉酶。口-淀粉酶是非常重要的工业酶种之一，在食品和酿造工业中有非常广泛 的用途。a一淀粉酶主要由以下三种形式存在：细菌Ct-淀粉酶、真菌a一淀粉酶、麦芽a一淀粉 酶。细菌a-淀粉酶热稳定性较强其钝化温度高达95℃以上，在面食品的高温加工过程仍 对淀粉具有水解作用，易使面团心发粘。麦芽a-淀粉酶酶活性较低，添加量为面粉的0．2 ～O．4％，因粘性较大，在实际应用中混合均匀较为困难。真菌a一淀粉酶热稳定性较差， 65℃以下就已失活，即使添加量过多，也不会造成面团心发粘的质量问题。因此近年来， 在我国面粉生产企业中，真菌n-淀粉酶已逐步得到推广与应用，并取得了良好的经济与 社会效益“ 。而且除了在面粉工业中的应用外，真菌a-淀粉酶在淀粉糖工业和酿造工 业中也有非常广泛的用途’”。真菌a一淀粉酶也成为一个引人关注的高效新型工业酶 种，引起了许多研究者的关注[1．“】。本研究从实验室收集的酒曲和酒药中分离得到一株 能产生的真菌口一淀粉酶菌株，编号为A019，初步鉴定为米曲霉，对该菌株的固态发酵产 酶条件进行了初步的研究，现将结果报道如下。 -作者简介：李江华(1966一)，用，副教授。硕士．主要从事发酵工程和酶技术的研究  李江华等：真菌口-淀耪酶产生苗的筛选及其固态发酵条件的初步研究- 1 材料与方法 1．1材料 1．1．1菌种 分离自酒曲和酒药中。 1．1．2培养基 1)斜面培养基(g／L) 蔗糖30，NaNa 3，MgSo．·7巩O 0．5，FeSo‘·7 H20 0．01，K2HPq·3H20 1， KCl 0．5，琼脂20，pH自然。 2)平板分离培养基(g／L) 蔗糖30，NaN03 3，MgS04·7H20 0．5，FeSO‘·7H20 0．01，K2HPq·3H20 1， KCl 0．5，玉米淀粉20．琼脂20．pH自然。 3)筛选培养基 250mL三角瓶中，麸皮79，豆饼粉39，K2：-IV04·3H20 0．3％，MgS04·7H20 0． 1 0A，(NH．)2so‘1％，水13mL。pH自然。 4)固态发酵培养基 250mL三角瓶中，麸皮89，豆饼粉2．289，酵母膏0．19，K2HPn·3H20 1％，Mg— SO‘·7HzO 0．094％，水12．9mL。pH5．0。 1．2方法 1．2．1平板筛选方法 将将酒曲和酒药用无菌水适当稀释，取一定量涂布于平板分离培养基．30C培养，产 a一淀粉酶的菌株会分解底物玉米淀粉产生透明圈，依据产生透明圈的早晚和透明圈直径 与茵落直径比值的大小分离出a一淀粉酶活性相对较高且产酶周期短的菌株，挑至斜面上 保存。 1．2．2复筛及发酵方法 将初筛菌种接人固体培养基中，30C恒温恒湿培养48h后，测定a一淀粉酶活力。 1．2．3酶活力的测定方法 1)酶液制备 发酵结束后，称取19固体曲，加10ml蒸馏水，25℃浸提30rain，然后过滤，取滤液适 当稀释测定酶活力。 2)酶活力测定‘“ 取20ml 2％的可溶性淀粉溶液和5ml pH 4．8磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲溶液于比色 管中，50℃恒温水浴中预热10min，然后加入适当稀释的酶液0．5ml，充分摇匀．定时取出 反应液0．5ml滴在预先装满稀碘液的白磁板空穴内，当颜色反应由紫色变成红棕色，最 终与标准终点色相同时，为反应终点，记录反应时同。由反应时闾计算酶活力。在上述 条件下，每小时液化1克