细胞培养_动物血清.docVIP

第一章 动物血清 有关血清的基本信息 40年来，研究者依赖Invitrogen公司GIBCO血清在体外再造适于细胞生长、繁殖和分化的生理环境。在提供细胞培养基、平衡盐溶液和培养用试剂的同时，GIBCO提供高品质的血清。GIBCO自1961年开始生产用于细胞培养的动物血清，是此行业的开创者。在三十多年的岁月里，一直保持在技术和品质方面的领先水平，血清和培养基的市场占有率常年蝉联全球第一。 GIBCO血清生产的纵向整体化管理 从血液收集到最终产品检验和内部稽核的每一个步骤，GIBCO都采用专用设备和标准操作程序，这种严格的控制可保证产品的高品质和最低的批间差。 可追踪性：血清品质的证据 GIBCO收集并保留从采血、处理、检测到发运的全部文件供追踪之用。 采 血 胎牛血清采用心脏穿刺的方法采血。马血清采自供体动物。新生牛血清采自出生10至14天的小牛。全部按照工业标准采血。 处 理 全部血清：收集的血液均在冷藏条件下处理。血清和凝块分离后立即将血清合并并冷冻。只有符合我们的检测标准的血清才被接受作进一步处理。 热灭活血清：热灭活是在56℃水浴中严格控温30分钟。 超低IgG胎牛血清：我们持有从血清中通过层析方法去除γ球蛋白的专利。经过这种程序处理的血清只有极低的IgG浓度（小于5μg/ml）但保持了血清的全部生物学活性。 透析血清：用12,000～14,000截留分子量的透析膜对0.15M的NaCl进行透析直到葡萄糖水平低于5mg/dl(用葡萄糖氧化酶/过氧化物酶方法检测)。为防止沉淀和血清中多肽的灭活，不进行过度的透析，因此一些小分子量的可透析成分如氨基酸不一定完全去除。 γ 射线照射血清：可按客户要求对血清进行γ射线照射。通过γ射线照射以灭活各种动物血清中的病毒和支原体的方法已经得到证实。研究证实照射剂量在30-45kGy为宜。这一数据符合最新的欧洲和美国FDA的标准，证实血清被照射后物理化学特性和细胞培养表现没有改变。 装 瓶 粗血清须通过一系列的过滤才成为成品。最后的过滤步骤包括0.2微米和0.1微米的无菌过滤。胎牛血清须通过三次100纳米过滤。 GIBCO的血清是在符合工业无菌标准1000级的严格操作条件下完成的。最高的无菌标准为1000000级，在没有终端灭菌的条件下是难以实现的。控制无菌状态的关键在于对所有与产品接触的材料的有效的灭菌程序、综合性环境监测程序、对最终过滤的整体检测程序等。此外，在正压条件下进行过滤和分装、HEPA过滤、环境控制等也是重要因素。 血清的包装采用GIBCO的E-Z HOLD 塑料瓶。在监测下进行灌装、标贴，并放置在-5～-20℃的储存温度下。直到质控报告完成，血清的品质被证实符合我们的标准后方可出厂。 有效期限 请参阅产品标签。 血清匹配和保留服务 由于采用严格的生产流程而使得GIBCO血清的批间差降至最低。但由于动物来源不同而导致的生物化学性质的差异也是不可避免的。GIBCO提供两种免费的方式以减小这种微小差异给您的研究带来的影响。 血清匹配程序：这一程序可以保证您所收到的血清具有您所要求的特性和培养表现。您只需简单地告诉我们您的要求，我们将向您提供与您的需求相匹配的某一批号血清。我们同样可以提供与您已经使用过的GIBCO血清相匹配的某一批号血清。使用这一程序，您将无须再做费时费力的批次检验工作，因为我们提供的血清与您的需求相匹配。 保留血清检验程序：对于一些极端敏感的应用，使用我们的保留血清检验程序可帮助您获得一个样品以检测是否适用于您的培养。在您对样品进行检测的同时，我们保留您所指定数量的同一批号产品。通常血清可保留4个星期，如您需更长的保留周期我们亦可安排。 最终产品的质量控制 我们采取以下方法对每一批次的产品选取一定数量的样品进行质量控制分析。 化学检测 渗透压：使用凝固点降低的方法检测渗透压。我们每天使用美国国家标准技术研究所标定的标准溶液对我们的渗透压检测仪器进行校准。 测定pH值：同样每天使用美国国家标准技术研究所标定的标准溶液对pH计进行校准 电泳图谱：鉴定血清的整体性质。样品被加到醋酸纤维素介质中并在缓冲体系内迁移。条带经染色、清洁、干燥后用密度仪进行扫描以检测白蛋白和球蛋白组分的相对浓度。 氧合血红蛋白检测：为证实是否在适当的条件下进行采血和处理，使用修饰的Fleming方法对血红蛋白进行分光光度检测。 血清总蛋白检测：随着动物年龄的增加血清总蛋白含量也相应地增加。使用自动化的Biuret方法进行总蛋白的测定以确证动物年龄。 免疫球蛋白的检测 我们利用高敏感度及高专一性的ELISA方法，来测定胎牛血清的免疫球蛋白G含量。 稳定性检测程序 在不同