乙肝表面抗原及乙肝两对半检测1PPT.ppt

临床意义 一、何谓PreS1Ag？ PreS1Ag是乙型肝炎病毒基因组前S1区编码的前蛋白，具有很强的免疫原性，是病毒表面抗原(HBsAg)的组成成分。它只存在于具有传染性的完整的乙肝病毒颗粒上，是黏附和侵袭人体肝细胞的主要因子。 * * * * * 乙肝表面抗原及乙肝两对半检测 主要内容 检测方法及原理 胶体金免疫层析法 酶免疫技术 免疫定量分析法 检测的方法及原理 检测方法及原理 胶体金免疫层析法 Part 1 胶体金免疫层析法 将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。 检测方法及原理 胶体金免疫层析法 Part 2 酶免疫技术 以酶标记的抗体（或抗原）作为主要试剂，将抗原抗体的特异性和酶高效催化反应的专一性相结合的一种免疫检测技术。酶结合物既保留抗体（或抗原）的免疫学活性，又保留酶对底物的催化活性。 特点：灵敏度高、特异性强、准确性好、试剂稳定、方 法简便易行 检测方法及原理 Part 2 两对半ELISA检测原理 1 HBsAg：双抗体夹心法 ——正比 单克隆HBsAb－HBsAg－多克隆HBsAb－HRP 2 HBsAb：双抗原夹心法 ——正比 HBsAg－HBsAb－HBsAg－HRP 检测原理 Part 2 两对半ELISA检测原理 3 HBeAg：双抗体夹心法 ——正比 单克隆HBeAb－HBeAg－多克隆HBeAb－HRP 4 HBeAb：竞争抑制法 ——反比 多克隆HBeAb－HBeAg－HBeAb－HRP / HBeAb（标本） 5 HBcAb：竞争抑制法 ——反比 HBcAg－HBcAb－HRP / HBcAb（标本） 检测方法及原理 Part 3 免疫定量分析方法 近年来，随着抗病毒药物的不断问世，以及抗病毒药物疗效与乙肝病毒及其血清标志物水平之间关系的相关研究不断深入，单纯HBsAg定性检测在疗效的监测，特别是根据其早期变化对远期疗效进行预测方面，显得越来越难以满足要求。而且，很多学者对一些新药上市注册临床试验结果进行分析发现，HBsAg的定量检测在抗病毒治疗疗效的监测方面确有非常重要的意义。因此，HBsAg的定量检测就显得十分重要。 检测方法及原理 Part 3 免疫定量分析方法 要想完成HBsAg定量检测，必须满足以下条件： ① 采用自动分析系统， ② 有可溯源的标准品， ③ 测定结果与标准品之间有线性关系。 检测方法及原理 Part 3 免疫定量分析方法 化学发光技术是近二十年来发展非常迅速的非放射性免疫分析技术。 　 化学发光免疫测定（Chemiluminesent Immunoassay，CLIA）是免疫测定技术继酶免技术（EIA）、放免技术（RIA）、荧光免疫技术（FIA）之后发展的一项新兴测定技术。由于这种测定具备很高的特异性和很小的干扰，因此，如同RIA、FIA等一样利用免疫反应的特异性和化学发光本身的信号特异性形成了目前所说的化学发光免疫测定（CLIA）技术。 检测方法及原理 Part 3 免疫定量分析方法 原理： 化学发光免疫分析仪是通过检测患者血清从而对人体进行免疫分析的医学检验仪器。将定量的患者血清和辣根过氧化物（HRP）加入到固相包被有抗体的白色不透明微孔板中，血清中的待测分子与辣根过氧化物酶的结合物和固相载体上的抗体特异性结合。分离洗涤未反应的游离成分。然后，加入鲁米诺Luminol发光底液 ，利用化学反应释放的自由能激发中间体，从基态回到激发态，能量以光子的形式释放。此时，将微孔板置入分析仪内，通过仪器内部的三维传动系统，依次由光子计数器读出各孔的光子数。样品中的待测分子浓度根据标准品建立的数学模型进行定量分析。最后，打印数据报告，以辅助临床诊断。 方法步骤 实验步骤 备注：因各厂家生产试剂操作方法 不同，故参见试剂盒说明书 结果判断及临床意义 一、结果判断 结果判断 Part 1 胶体金免疫层析法结果判断 以艾康生物检测试剂盒为例： 阳性（+）：两条红色条带出现，一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）。阳性结果