4-PCR技术.pptVIP

;PCR技术 (1)概念：在____快速扩增___________________________ _____的实验技术称为PCR技术。 (2)物质条件 体外进行DNA复制的各种组成成分有：_________、_____ ___________、_________、_____。 (3)PCR的反应过程 PCR一般经历三十多次循环，每次循环可以分为_____ _______________________和_____(72 ℃左右)。;;细胞内DNA复制与体外DNA扩增(PCR技术)的比较;相 同 点;引物设计原则;防止引物自身形成二级结构 一对引物的顺序不应自身互补 特别要避免3’-端的重叠，以免形成二聚体等特异的扩增条带 防止发卡结构 、茎环结构 ！; 下图为某一次循环的产物，请据图回答问题。; 聚合酶链式反应(PCR技术)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，其简要过程如下图所示。下列关于PCR技术的叙述，不正确的是 (　　)???; 聚合酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历30多次下述循环：94 ℃条件下使模板DNA变性、解链→56 ℃条件下退火(引物与DNA模板链结合)→72 ℃条件下引物链延伸(形成新的脱氧核苷酸链)。下列有关PCR过程的叙述，不正确的是 (　　)。;A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键， 也可利用解旋酶实现 B．退火过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补 配对原则完成的 C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、4种核糖核苷酸 D．PCR与细胞内DNA复制相比，其所需要酶的最适温度 较高 思维导图：; 下列有关PCR技术的叙述，不正确的是(　　)。 A．又称聚合酶链式反应，是一种体外迅速扩增DNA片段 的技术 B．在用PCR技术扩增DNA时，DNA的复制过程与细胞内 DNA的复制类似 C．PCR反应只需在一定的缓冲溶液中提供DNA模板以及 四种脱氧核苷酸 D．PCR一般经历三十多次循环，每次循环分为变性、退 火、延伸; 进行目的DNA片段的体外扩增，下列选项不需要的是 (　　)。 A．DNA聚合酶 B．解旋酶 C．Mg2＋ D．引物 解析　DNA体外扩增是利用的DNA热变性原理，不需解旋酶。 答案　B;下列关于DNA复制叙述中，正确的是 (　　)。 A．DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从5′端延伸 DNA链 B．DNA复制不需要引物 C．引物与DNA母链通过碱基互补配对进行结合 D．DNA的合成方向总是从子链的3′端向5′端延伸 解析　本题主要考查了DNA聚合酶的作用特点。由于DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从引物的3′端延伸DNA链。由于模板链首先复制的是3′端，即复制方向3′→5′，而DNA分子是反向平行的，子链是依据碱基互补配对原则，在DNA聚合酶作用下合成的，其合成方向从子链5′→3′。 答案　C;PCR利用了DNA热变性的原理，PCR仪实际上是一种能自动调节温度的仪器。下列对PCR过程中温度的控制的说法错误的是 (　　)。 A．酶促反应需要高温，是为了保证模板是单链 B．延伸的温度必须高于退火的温度，而低于变性的温度 C．要用耐高温的DNA聚合酶 D．需要耐高温的解旋酶 解析　PCR是体外DNA扩增技术，DNA双链的解开不需要解旋酶，靠高温使其变性。 答案　D;A．向右的过程为加热(80～100 ℃)变性的过程 B．向左的过程是DNA双链迅速制冷退火 C．变性与在生物体内解旋过程的条件、实质都相同 D．图中DNA片段共有4个游离的磷酸基、4个3′端 解析　变性后的DNA在缓慢降温后才会退火；变性与在生物体内解旋过程的条件不同，实质相同；任一DNA片段都有2个游离的磷酸基(5′端)和2个3′端。 答案　A;PCR一般要经过三十多次循环，从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链做模板时将 (　　)。 A．仍与引物Ⅰ结合进行DNA子链的延伸 B．与引物Ⅱ结合进行DNA子链的延伸 C．同时与引物Ⅰ和引物Ⅱ结合进行子链延伸 D．无需与引物结合，在酶的作用下从头合成子链 解析　此题考查同学们对PCR反应中的变性、退火、延伸的实质能否真正理解。当由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链做模板时，此单链引物端为5′端，因此与它互补的子链应从另一端开始合成，即由引物Ⅱ结