原生质体融合的研究.pptVIP

原生质体融合的研究 文献综述的主要内容 1、研究原生质体融合的原因 2、研究原生质体融合的意义 3、原生质体融合研究的历史 4、原生质体融合研究的现状 5、原生质体融合的原理 6、尚存的问题 7、对原生质体融合以后研究的开展 利用原生质体融合可以进行异核体杂种的培育。作物的优良性状往往受多基因控制，基因工程很难实现多基因转移，而原生质体融合为一次性多基因性状的改良提供了途径。一些作物利用有性杂交进行远缘杂交不易获得成功，体细胞杂交解决了这一问题，它不仅可在相同的物种之间进行杂交，而且可进行不同物种间的杂交，甚至在动、植物之间进行杂交，目前马铃薯抗卷叶病及抗晚疫病等特性已通过体系胞杂交由野生种转移到载培种中。 1、微生物原生质体融合技术在水质净化中的应用 2、在微生物育种方面显示出了巨大的潜力. 3、单克隆体的制备 ５、克服远缘杂交不亲和的障碍、培育新品种 发展简史 自从1960年用酶法制备大量植物原生质体首次获得成功以来，原生质体培养成为生物技术最重要的进展之一。原生质体的分离研究较早，1892年Klereker首先用机械的方法分离得到了原生质体，但数量少且易受损伤。1960年，英国植物生理学家Cocking首先用酶解法从番茄幼苗的根分离原生质体获得成功。他使用一种由疣孢漆斑菌培养物制备的高浓度的纤维素酶溶液降解细胞壁。 然而，直至1960年纤维素酶和离析酶成为商品酶投入市场以后，植物原生质体研究才成为一个热门的领域 至今从植物体的几乎每一部分都可分离得到原生质体。并且能从烟草、胡萝、矮牵牛、茄子、番茄等70种植物的原生质体再生成完整的植株。此外，原生质体融合，体细胞杂交的技术也得到广泛的应用。 1958年, Okada发现紫外灭活的仙台病毒可引起艾氏腹水瘤细胞彼此融合。由于仙台病毒能稳定地诱发细胞融合而引起了许多科学家的兴趣，60年代，Harris(1965)诱导不同的动物体细胞融合获得成功并能存活下来。Lifflefield(1964)根据亲本细胞的酶缺陷型，利用HAT选择性培养基能使亲本细胞死亡而只留下异型融合细胞，并能不断地增殖，从此形成了细胞融合到杂种细胞选择、培养的一整套技术。使这一技术在此后广泛地应用于遗传学、病毒学、免疫学、细胞学等多种学科的研究工作中。 1975年，免疫学家Kohler和Milstein利用仙台病毒诱导绵羊红细胞免疫的小鼠脾细 胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，选择到能分泌单一抗体的杂种细胞。该杂种细胞具有在小鼠 体内和体外培养条件下大量繁殖的能力，并能长期地分泌单克隆抗体，从而建立了小鼠 淋巴细胞杂交瘤技术。这一技术的诞生把细胞融合技术从实验阶段推向了应用研究阶段， 促进了动物细胞工程的蓬勃发展。 原生质体研究的进展 l 1880年，Hanstein首次起用原生质体(protoplast)一词。 l 1960年，Cocking首次应用酶法制备番茄根原生质体获得成功。 1971年，Takebe etl al.首次得到烟草叶肉原生质体培养的再生植株。 1985年，Fujimura et al.第一例禾谷类作物－水稻原生质体培养再生植株。l l 1986年，Spangenberg et al.单个原生质体培养再生植株在甘蓝型油菜上获得成功。 据统计，目前已有49个科，146个属的320多种植物经原生质体培养得到了再生植株（1993）。其趋势仍以农作物和经济作物为主，但从一年生向多年生、草本向木本、高等植物向低等植物扩展。 基本原理 对于植物细胞而言，一般先将两种 不同植物的体细胞（来自根或叶）经过 纤维素酶、果胶酶消化，除去细胞壁， 得到原生质体；再通过物理或化学方法 诱导其细胞融合形成杂种细胞；继而再 以适当的技术进行杂种细胞的分检和培 养，促使杂种细胞形成细胞团、愈伤组 织、直至形成杂种植株，从而实现基因 在远缘物种间的转移。 由于动物细胞不含有细胞壁，在自然 条件下，其发生融合的可能性要比植物 细胞大，故多核细胞现象容易在动物界 发生。 体细胞杂交的基本环节 1、原生质体的分离和培养 2、原生质体间的融合 3、合后杂种细胞的选择 4、诱导杂种细胞产生愈伤组织和再生植株 动物细胞融合---单克隆抗体生产 单克隆抗体(Monoclonal Antibody，McAb)即单个B淋巴细胞克隆所分泌的抗体。 抗体主要由机体的B淋巴细胞合成，每个B淋巴细胞有合成一种抗体的遗传基因。当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决 定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成该细胞的子孙，即克隆。如果选出一个合成一种抗体的细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞所合成的抗体即为单克隆抗体。 尚存的问题 虽然原生质体融合阶段不存在异种间的任何不亲和性