蛋白激酶d1在大鼠急性胰腺炎中作用机制的实验分析word论文.docxVIP

蛋白激酶 D1 在大鼠急性胰腺炎中作用机制的实验研究研究生：周振华导师：张树友教授中文摘要目的探讨蛋白激酶 D1(Protein Kinase D1,PKD1) 在实验性大鼠急性胰 腺炎（ acute pancreatitis,AP)中的作用及其分子学机制。方法将66只健康级雄性 Sprague-Dawley（SD）大鼠(体重约250 ??30g)，随机分为三 组:急性胰腺炎模型组（A 组），急性胰腺炎+CID755673（蛋白激酶 D1抑制剂）腹 腔注射干预组（B 组），假手术组（C 组）。A 组和 B 组采用微量泵胰胆管逆行缓 慢注射3.5％牛磺胆酸钠溶液建立大鼠 AP 模型，C 组大鼠仅开腹翻动胰腺数次。 A 组于关腹后3h，6h，9h，12h，24h 五个时间点各处死6只大鼠，B 组及 C 组于 关腹后3h，6h,12h 三个时间点各处死6只大鼠，采集心脏血标本立即送检血淀粉 酶（ amylase,AMS) ， 酶联免疫吸附试验 法 (enzyme linked-immuno-sorbentassay,ELISA)检测肿瘤坏死因子-ɑ（tumor necrosis factor-alpha，TNF-ɑ）、白介素-6（interleukin-6，IL-6)水平。观测胰腺大体病理变化并切取部分胰腺组织用预冷 的 PBS 溶液将血液洗净后，采用 Western-Blot 方法检测 PKD1、天冬氨酸特异的 半胱氨酸蛋白酶-3(cystein aspartate specific protease-3,Caspase-3)的水平；另一部 分用于 HE 染色、脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling，TUNNEL）染色以及核转 录因子-kappa B（Nuclear factor-kappa B,NF-kB)免疫组织化学染色，然后在光镜 下观察。结果1.各组 AMS、TNF-alpha、IL-6 及 NF-kB 结果：C 组各时间位点的 AMS、TNF-alpha、 IL-6 及 NF-kB 水平均明显低于 A 组和 B 组相应时间位点的 AMS、TNF-alpha、IL-6 及 NF-KB 水平（P0.05）。B 组各时间位点的 AMS、TNF-alpha、IL-6 及 NF-KB5水平明显低于 A 组相应时间位点的 AMS、TNF-alpha、IL-6 及 NF-KB 水平（P0.05）。2.各组胰腺组织中蛋白激酶 D1 的表达情况：C 组（12h 位点）中蛋白激酶 D1 的表达明显低于 A 组（12h 位点）和 B 组（12h 位点），B 组(12h 位点）的蛋 白激酶 D1 表达明显低于 A 组（12h 位点），有统计学意义（P0.05）。A 组中蛋 白激酶 D1 表达在 0-12h 时间段内呈时间依赖性，即从 3h 位点逐渐上升，12h 表 达最高，而 24h 位点依然高表达，但低于 12h 位点的表达。3.各组胰腺组织中 Caspase3 的表达情况：A 组（12h 位点）中的表达显著低 于 B 组（12h 位点），但 A 组（12h 位点）、B 组（12h 位点）中的表达显著高于 C 组（12h 位点），差异有统计学意义（P＜0.05）。4.各组大鼠胰腺组织病理学评分结果：C 组各时间位点病理学评分明显低于A 组和 B 组各时间位点（P0.01），B 组各时间位点病理学评分低于 A 组各时间 位点（P0.01），且 A 组中 3h 位点病理评分低于 6h 位点，6h 位点病理评分低于 12h 位点（P0.05)，有统计学意义。5.各组胰腺组织HE染色病理结果：C组各时间位点胰腺腺泡结构完整，间质 稍有水肿，无显著病理学改变。A组各时间位点胰腺组织充血水肿明显，腺泡结 构紊乱，可见胰腺组织坏死崩解，间隙模糊不清，有中性粒细胞及红细胞浸润， 随时间位点的延长，有加重趋势。B组各相应时间位点病理变化同A组相似，但 充血水肿、坏死崩解程度及病理损伤程度较A组减轻。6.各组胰腺组织凋亡水平结果：与C组相比较，A组、B组各时间位点的凋亡指数较高（P＜0.05）；与A组相比较，B组各时间位点的凋亡指数显著升高（P＜0.05）。结论1.蛋白激酶D1在大鼠急性胰腺炎中高表达，且在3h-12h区段呈时间依赖性； CID755673可有效地减少蛋白激酶D1在大鼠急性胰腺炎中的表达。 2.CID755673可显著降低血清AMS、TNF-alpha及IL-6的水平，减少胰腺组织NF-?B 的表达，改善急性胰腺炎的炎症活动。3.CID755673可提高胰腺组织Caspase-3表达水平，升高胰腺组织凋亡水平，