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2016.9.19 请结合自己的专业，简单设计一个免疫组织化学标记的方案来研究一个课题（一抗和二抗的名称和来 源，一抗的定位预测；实验方案，生物学意义和临床意义，实验设计（每个对照组的意义）。结果判断。 一抗：鼠抗人VEGF单克隆抗体；二抗：羊抗小鼠Biotin标记抗体；一抗的定位预测：表达在肺组织的细胞浆中；实验方案：选择非小细胞肺癌组织、癌旁组织、正常肺组织三组石蜡标本切片。通过抗体标记 VEGF，经过免疫组化染色后判定相关蛋白表达与肺细胞癌的临床病理特征的关系。生物学意义：VEGF是肿瘤血管生成和侵袭转移过程中的关键因素，可以通过其相关的特异性受体选择性作用于内皮细胞发挥作用。临床意义：通过了解非小细胞肺癌VEGF的表达，可能预测非小细胞肺癌的转移、预后，从而指导抗肿瘤治疗。实验设计：通过设立癌旁组织和正常肺组织的对照组，对比所研究蛋白在不同组织中表达的差异，进而得出实验结论。结果判断： 免疫组化染色后，利用电脑的病理图文报告分析系统进行结果判读，对染色结果定量分析。掌握以下原则：阳性细胞定位是否明确，是胞膜、胞浆还是胞核阳性间质清晰，无背景着色；阳性细胞要在5％以上，才能定为阳性；参考评价： ＜5% -, 5％－25％ ＋， 25％－50％ ＋＋，＞50％ ＋＋＋。 免疫组化的应用范围。 1）提高病理诊断准确性；2）对疾病的预后和治疗的意义；3）癌基因蛋白的应用；4）对肿瘤增生程度的评价；4）微小病灶的发现；5）在肿瘤分期上的意义；6）指导肿瘤的治疗；7）免疫性疾病的辅助诊断；8）病原微生物的检测； 何谓“套餐式”免疫标记？举两例说明 每一种组织的标记物必须用2种以上的抗体，除了能够阳性正面证实的抗体，还要有能阴性反面证实的抗体。例如： Keratin,Vimentin,LCA,S100四种抗体组合。Keratin角蛋白，存在于上皮细胞，Keratin阳性且其它阴性的结果可以筛选出可疑癌或生殖细胞瘤；Vimentin波纹蛋白，存在于间质细，LCA存在于血细胞，Vimentin和LCA阳性的结果可以筛选出可疑淋巴瘤；S-100 存在于神经内分泌细胞，Vimentin和S100阳性的结果可以筛选出可疑神经内分泌肿瘤；Vimentin阳性的结果可以筛选出可疑肉瘤。 胃肠道间质瘤GIST检测CD117,DOG-1,CD34. 何谓靶向治疗？举两例说明。 肿瘤分子靶向治疗是盲点：由于抗体稀释度、多克隆抗体特异性问题、试剂盒选择、操作中时间温度染色过程等因素使其在结果判断上存在“假阳性”和“假阴性”；影响因素很多，使结果判断的标准化问题尚难统一；存在抗原抗体交叉反应、抗原联合表达等问题。 超敏反应：超敏反应（hypersensitivity ），即异常的、过高的免疫应答。即机体与抗原性物质在一定条件下相互作用，产生致敏淋巴细胞或特异性抗体，如与再次进入的抗原结合，可导致机体生理功能紊乱和组织损害的免疫病理反应。又称变态反应。免疫逃逸：肿瘤免疫逃逸（Tumor escape）是指肿瘤细胞通过多种机制逃避机体免疫系统识别和攻击，从而得以在体内生存和增殖的现象。 为什么体内会产生自身抗原？ 阐述自身免疫病的发病和组织损害的可能机制。 (一) 抗原因素 1. 自身Ag性质的改变2. 交叉抗原的作用3. 隐蔽Ag的释放4. 表位扩展 (二) 机体免疫功能的异常 1. MHC-Ⅱ类Ag表达↑2. 免疫调节异常3.协同刺激分子异常表达4. 多克隆激活作用5.细胞凋亡途径异常6. 固有免疫在AID中的作用 (三)遗传因素 (四)其他因素1.生理性因素2.神经内分泌因素 调节性T细胞的特点、功能及其与疾病的关系。 Treg通过直接接触方式或通过分泌IL-10、TGF-b等细胞因子抑制T细胞、巨噬细胞、DC和B细胞活化、增殖及细胞因子产生。 静息状态下，Treg细胞约占外周T细胞总数的5~10%，绝大多数来源于胸腺，为自然调节性T细胞（natural Treg，nTreg）。在新生期切除小鼠胸腺将导致这群细胞的缺失和自身免疫病。 在适当诱导条件下，外周初始CD4+ T细胞受外来抗原刺激后也能分化成具有抑制活性的细胞，即所谓“诱导性调节性T细胞（inducible Treg，iTreg）”。 2016.10.10心血管（这个不确定，看着有点怪怪的） Taking Home message 1.Heart 2.EC coupling 3.Ca induced Ca release 4.Cardiac conduction system 5.Cadiomyopathy Atherosclerosis Cardiomyopathy AKAP Z line Striated muscle 肌小的结构 细胞的钙信号 C分类和各自的主要特征 心脏病