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产植酸酶菌株青霉P11发酵条件的研究 　　摘要： 研究了不同碳源、氮源等对青霉Ｐ１１液体发酵产植酸酶的影响。菌株P11发酵产植酸酶的最佳碳源为蔗糖，氮源为蛋白胨和硝酸铵。最适发酵产酶条件为培养温度３０，发酵培养基最适ｐＨ值５，摇瓶装液量１０％，接种量４％，摇床转速１２０ ｒ／ｍｉｎ，培养时间９６ ｈ，最高酶活性可达２．６３ Ｕ／ｍＬ。 　　关键词：青霉Ｐ１１；植酸酶；产酶条件；酶活 　　中图分类号：Ｑ９３９．９７ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８11406－1269-03 　　 　　Studies on the Culture Conditions of Phytase Producing Penicillium P11 　　ＨＵＡＮＧ Ｆａｎｇ－yｉ１，ＺＨＯＮＧ Ｙｉ２, LIU Yan1 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｖａｒｉｏｕｓ ｃａｒｂｏｎ ａｎｄ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｓｏｕｒｃｅｓ ｏｎ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ Ｐ１１ ｔｈａｔ ｐｒｏｄｕｃｅｓ ｐｈｙｔａｓｅ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃａｒｂｏｎ ａｎｄ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｆｏｒ ｔｈｉｓ ｓｔｒａｉｎ ｗｅｒｅ ｓｕｃｒｏｓｅ， ｐｅｐｔｏｎｅ ａｎｄ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｎｉｔｒａｔｅ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｗａｓ ｃｕｌｔｉｖａｔｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｔ ３０， ｐＨ ｏｆ ｔｈｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ ａｔ ５； ｍｅｄｉｕｍ ｑｕａｎｔｉｔｙ， １０％； ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ， ４％； ｒｏｔａｔｅ ｓｐｅｅｄ ｏｆ ｔｈｅ ｓｈａｋｅｒ， １２０ｒ／ｍｉｎ； ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ， ９６ｈ． Ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｃｏｕｌｄ ｒｅａｃｈ ２．６３Ｕ／ｍＬ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ Ｐ１１； ｐｈｙｔａｓｅ； ｅｎｚｙｍｅ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ； ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ 　　 　　植酸酶是催化植酸水解成肌醇与磷酸的一类酶的总称。它能水解植酸而释放出无机磷，是一种优良的环保型食饲两用酶制剂。其生产主要来源于微生物，且绝大多数属于酸性植酸酶。一般来讲，微生物源植酸酶最适ｐＨ值范围较植物源的宽，细菌源植酸酶最适ｐＨ值一般为中性或偏碱性，真菌源植酸酶最适ｐＨ值为２．５～７．０，最适温度为４０～６０［１－３］。大多数微生物植酸酶适宜ｐＨ值在酸性范围内，接近动物胃、肠道内的ｐＨ值，因而能在动物胃、肠道内保持较高活性并发挥催化作用。褚西宁等［４］在国内首次分离到一种产植酸酶的青霉菌――变灰青霉。随后，白玉明等［５］、陈旭等［６］、何平等［７，８］、王尊生等［９］、刘红蕾等［１０］也对产植酸酶青霉菌进行了不同程度的研究。当前，国外使用的植酸酶产生菌以 ＮＲＲＬ ３１３５ 菌株研究得较为详细［１１］。本研究用正交试验对一株产植酸酶的青霉Ｐ１１的产酶培养基及产酶条件进行优化，以期为植酸酶性质研究和工业化生产提供一些基础资料。 　　１材料与方法 　　１．１材料 　　１．１．１青霉青霉保藏于武汉生物工程学院发酵工程实验室。 　　１．１．２培养基斜面培养基：ＰＤＡ培养基；发酵培养基：碳源４．０％、氮源总量１．０％、ＫＣｌ ０．０５％、ＭｇＳＯ４ ０．０５％、ＦｅＳＯ４ ０．００3％、ＭｎＳＯ４ ０．００2％。 　　１．２方法 　　１．２．１摇瓶培养将活化的青霉Ｐ１１接种于２５０ ｍＬ摇瓶中，置于转速为１２０ ｒ／ｍｉｎ的摇床上，３０发酵培养４～５ ｄ。 　　１．２．２酶活的测定在反应试管中加入０．５ ｍＬ ２０ ｍｍｏｌ／Ｌ植酸和３ ｍＬ乙酸缓冲液，５０保温３０ ｍｉｎ，加入０．５ ｍＬ植酸酶酶液，反应３０ ｍｉｎ后，用２ ｍＬ １０％ＴＣＡ终止反应，测定发酵液中无机磷的含量［１２］。一个酶活性单位定义为：样品在指定的温度、ｐＨ值等条件下，每分钟释放出１ μｍｏｌ无机磷所需的酶量。酶活为每毫升酶液中所含酶活性单位。 　　２结果与分析 　　２．１碳源对发酵产酶的影响 　　分别以４．０％的葡萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、可溶性淀粉作为碳源，３０、１２０ ｒ／ｍｉｎ摇瓶中培养９６ ｈ后测定酶活，结果见图１。该菌碳源谱较广，对乳糖的利用能力最弱，发酵产酶活性远远低于其他碳源；对蔗糖的利用能力最强，明显优于其他碳源，蔗糖来源广泛，价格低廉，适合工业化生产，文献［１３，