产碱性纤维素酶菌株的筛选及酶学性质研究.docVIP

产碱性纤维素酶菌株的筛选及酶学性质研究 　　摘要：从采集的造纸厂土样中，筛选出ｌ株产碱性纤维素酶酶活力较高的菌株Ｈ－１，经鉴定，该菌株为革兰氏阳性芽孢杆菌属。发酵产酶条件和酶学性质研究表明Ｈ－１菌株的适宜发酵条件为：接种量为６％，ｐＨ ９．０，温度为３７ ，此条件下的酶活力可达８．６９ Ｕ／ｍＬ，是初始酶活力的３倍。该酶最适反应温度为４０ ，最适反应ｐＨ ９．０。在２５～５５ ，ｐＨ ７．０～１１．０仍能保持６０％以上的酶活力，能较好地满足日常洗涤的环境要求。 　　关键词：碱性纤维素酶；菌株筛选；发酵条件；酶学性质 　　中图分类号：Ｑ９３９．９６文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11421－4364-04 　　 　　Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ Ａｌｋａｌｉｎｅ－Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ Ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｓｔｒａｉｎ ａｎｄ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｉｔｓ Ｅｎｚｙｍａｉｃ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ 　　 　　ＬＵ Ｊｉｎ－ｚｈｅｎ１，ＲＥＮ Ｊｕｎ１，ＹＡＮＧ Ｗｅｎ－ｃｈａｏ１，ＸＩＯＮＧ Ｈａｎ－ｇｕｏ２ 　　 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｆｒｏｍ ｓｏｉｌ ｓａｍｐｌｅｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｐａｐｅｒ ｍｉｌｌｓ， ｏｎｅ ｓｔｒａｉｎ ｃａｌｌｅｄ Ｈ－１ ｃａｐａｂｌｅ ｏｆ ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｗａｓ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ Ｇｒａｍ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｅｎｚｙｍｅ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ， ｉｎｏｃｕｌｕｍ ａｍｏｕｎｔ ６％， ｐＨ ９．０ ， ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ３７ ． Ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗａｓ ｕｐ ｔｏ ８．６９ Ｕ／ｍＬ， ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ３ ｔｉｍｅｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｉｎｉｔｉａｌ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ａｂｏｕｔ ４０ ａｎｄ ｐＨ ９．０． Ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｍａｉｎｔａｉｎｅｄ ａｂｏｖｅ ６０％ ａｔ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ２５～５５ ａｎｄ ｐＨ ７．０～１１．０， which ｍｅｅｔ ｔｈｅ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄａｉｌｙ ｗａｓｈｉｎｇ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： aｌｋａｌｉｎｅ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ enzyme； strain sｃｒｅｅｎｉｎｇ； ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ； ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅ 　　 　　纤维素酶的研究一般都以有效利用纤维素资源为主，酶作用的ｐＨ多为酸性，当添加到洗涤剂中，由于所处环境为碱性而失去活力，不能发挥作用［１］。近年来碱性纤维素酶的发现使其在洗涤工业中得到成功应用。碱性纤维素酶是纤维素酶系的一个组分，即羧甲基纤维素酶，它不含有纤维素酶系的其他两个组分，能作用于底物ＣＭＣ。ＣＭＣ属大分子多糖衍生物，它被降解后生成多种相对分子质量不等的低聚糖。碱性纤维素酶在对天然纤维素作用的过程中不能发生酶组分间的协同效应，不会使棉纤维受到较多的分解破坏［２，３］。它主要对棉纤维中占1０％左右非结晶区的纤维素分子起作用，对结晶区纤维素水解活力很低，因此不会明显降低棉纤维的牢固度，并能去除侵入衣物内部的尘泥皮脂，显著提高洗涤效果，节约洗涤活性物用量，减少环境污染，是目前世界洗涤工业发展的趋势［４］。因此研究和开发碱性纤维素酶产品具有重要的现实意义和经济价值。 　　本试验从碱性土壤中筛选出1株产碱性纤维素酶的野生菌株，并对其摇瓶发酵产酶条件和酶学性质进行了研究，以期为工业化生产提供一定的理论参考。 　　１材料与方法 　　１．１材料 　　１．１．１土样来源取自湖北省武汉市阳逻、黄陂等地造纸厂的碱性土壤。 　　１．１．２培养基斜面保藏培养基配方为：羧甲基纤维素钠１０ ｇ，酵母膏４ ｇ，牛肉膏５ ｇ，蛋白胨５ ｇ，ＮａＣｌ ５ ｇ，ＫＨ２ＰＯ４ １ ｇ，琼脂粉１５ ｇ，０．２ ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠调至ｐＨ ９．０。分离培养基Ａ：蛋白胨１０ ｇ，酵母膏１０ ｇ，羧甲基纤维素钠１０ ｇ，ＮａＣｌ ５ ｇ，ＫＨ２ＰＯ４ １ ｇ，琼脂粉１５ ｇ，０．２ ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠调至ｐＨ ９．０。分离培养基Ｂ：ＫＨ２ＰＯ４ ２ ｇ，２ＳＯ４ １．４ ｇ，ＭｇＳＯ４ ０．３ ｇ，ＣａＣｌ２ ０．３ ｇ，ＦｅＳＯ４ ０．００５ ｇ，ＭｎＳＯ４ ０．００１ ６ ｇ，ＺｎＣｌ２ ０．００１ ７ ｇ，ＣｏＣｌ２