毒理学第06章食物中化学物质的致突变作用及评价PPT.ppt

第六章 致突变作用; 第六章 食物中化学物质的 致突变作用及评价;6.1 概述;一、基本概念;一、基本概念;一、基本概念;二、遗传性基础;二、遗传性基础;二、遗传性基础;3、染色体与基因有着平行的关系;二、遗传性基础;二、遗传性基础;二、遗传性基础;二、遗传性基础;二、遗传性基础;6.2 化学毒物致突变的类型;一、基因突变;一、基因突变;一、基因突变;一、基因突变;一、基因突变;一、基因突变;二、染色体畸变;二、染色体畸变;二、染色体畸变;二、染色体畸变;三、非整倍体与多倍体;6.3 化学毒物致突变作用的机制及后果;1、碱基损伤;1、碱基损伤;1、碱基损伤;1、碱基损伤;1、碱基损伤;1、碱基损伤;2、DNA链受损;二、引起突变的细胞分裂过程的改变;二、引起突变的细胞分裂过程的改变;三、其他的改变;四、突变的后果;1、生殖细胞突变;1、生殖细胞突变;1、生殖细胞突变;1、生殖细胞突变;1、生殖细胞突变;我国新生儿染色体异常人数的估算;2、体细胞突变;2、体细胞突变;2、体细胞突变;6.4 机体对致突变作用的影响;;§ 6-5 致突变试验;2. 致突变试验项目的组合 遗传毒理学评价程序通常为一组体内、外遗传毒理学 试验。因为： ①化学毒物的种类和结构多种多样，其致突变的机制 不尽相同，作用的靶细胞也不一样。 ②致突变物中仅少数具有直接致突变作用，大多数为 间接致突变作用，即需要在体内代谢活化后，才具 有致突变作用。 ③化学毒物的致突变性有强，也有弱；有的在某一检 测系统中是强致突变物，而在另一系统中可能是弱 的致突变物。;入选原则： ①选择的遗传毒性试验应包括5种类型的遗传学终点。 ②实验指示生物应包括若干进化阶段的物种，既要包括原核生物，又要包括真核生物。 ③体内试验与体外试验配合。 ④应包括生殖细胞和体细胞。 通常，对于一种受试物应当先用原核细胞或体细胞 的体外试验按遗传学终点合理配套进行试验，并对 有阳性结果的遗传学终点验证其在体内的真实性， 再行选用生殖细胞致突变试验进行遗传危害的评价。; 二、常用的致突变试验 1．鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验 2．微核试验 3. 染色体畸变分析 姐妹染色单体交换试验（SCE） 果蝇伴性隐性致死试验 显性致死试验 程序外DNA合成试验 单细胞凝胶电泳（SCGE）试验 ;鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验 又称Ames试验，检测受试物诱发鼠伤寒沙门氏菌 组氨酸营养缺陷型突变株(his-)回复突变成野生型 (his+)的能力。 标准试验菌株有四种： TA97和TA98：检测移码突变； TA100：检测硷基置换突变； TA102：对醛、过氧化物及DNA交联剂较敏感。 试验方法：点试验(预试验)， 掺入试验(标准试验) 。 ;①微核：经致突变物作用后，染色体无着丝点断片或 　因纺锤体受损伤而丢失的整个染色单体在细胞 　分裂的后期仍留在子细胞的胞质内，成为一 　个或几个规则的次核，称为微核。 ②微核试验是观察受试物能否产生微核的试验。 　主要可检出DNA断裂剂和非整倍体诱变剂。 ③方法：啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核 　试验。 剂量分组：1/2LD50、1/4LD50、1/8LD50。同时设阴 性对照和阳性对照组。;MN;三、试验结果的评定 ;四、致突变试验中的一些问题;2. 体外试验的活化系统 前致突变物：本身不具致突变性，经哺乳动物代谢 才转化成致突变物的化学物质。 ①哺乳动物细胞介导???使用完整的细胞，特别是大鼠肝原代 细胞，与测试细菌或细胞一起培养。 ②S9：经酶诱导剂处理后制备的肝匀浆，再经9000g离心分 离所得上清液，加上适当的缓冲液和辅助因子。 ③纯化酶和基因工程。 纯化酶：纯化的细胞色素P450、谷光苷肽转 移酶、过氧化 物酶。 基因工程：将人的细胞色素P450基因插入组合细胞内，再进 行致突变试验，使细胞具有代谢活化系统。;3. 致突变试验与致癌试验的关系 （1）化学物质按遗传毒性和致癌性分为四类： ①遗传毒性致癌物； ②非遗传毒性致癌物；（假阴性） ③遗传毒性非致癌物；（假阳性） ④非遗传毒性非致癌物。 （2）致癌物检测方法 ①短期试验； ②哺乳动物诱癌试验； ③人类流行病学调查。