大白菜软腐病颉颃菌筛选及其发酵条件研究.docVIP

大白菜软腐病颉颃菌筛选及其发酵条件研究 　　摘要：从大白菜软腐病的原位土壤中分离得到２４株细菌，通过平板对峙法筛选得到２株具有明显抑制作用的菌株，分别命名为ＢＲＪ１和ＢＲＪ２。通过发酵条件试验表明：两种颉颃菌均为好氧菌；其中菌株ＢＲＪ１对数生长期为０～８ｈ，在中性偏酸的环境下生长良好，适宜生长温度为３０～３５；菌株ＢＲＪ２对数生长期为４～１３ｈ，在ｐＨ值为４．５～９．５的条件下生长良好，最适生长温度为３２。共同发酵时，应在中性环境，温度控制在３２左右，定期翻堆以提供充足的氧气。 　　关键词：大白菜；软腐病；颉颃菌；发酵条件 　　中图分类号：Ｓ４３６．３４１．１＋３；Ｑ９３９．１ 文献编识码：Ａ 文章编号：0439－８11402－0281-04 　　 　　 Ｓｃｒｅｅｎ ｆｏｒ Ｅｒｗｉｎｉａ Ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉａ ａｎｄ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｉｔｓ 　　Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ 　　 　　ＬＩ Ｊｕａｎ，ＬＩ Ｈｏｎｇ-ｌｉ，ＷＡＮＧ Ｙａｎ 　　 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ａｆｔｅｒ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ， ２４ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｉｎｓｉｔｕ ｆｉｅｌｄ． Ｗｅ ｆｏｕｎｄ ｔｈａｔ ２ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｔｒａｉｎｓ， ｎａｍｅｄ as ＢＲＪ１ ａｎｄ ＢＲＪ２， displayed ａｐｐａｒｅｎｔ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｔｏ Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ ｔｈｒｏｕｇｈ ｐａｉｒｉｎｇ ｃｕｌｔｕｒｅ． Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｖｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ， ＢＲＪ１ ａｎｄ ＢＲＪ２ ｗｅｒｅ ｒｅｇａｒｄｅｄ ａｓ ａｅｒｏｂｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａｓ． Ａｓ ｆｏｒ ＢＲＪ１， ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｐｈａｓｅ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ０~８ｈ， ｔｈｅ suitable pＨ ｗａｓ ａｃｉｄ ｏｒ ｎｅｕｔｒａｌ， ａｎｄ ｃｕｌｔｕｒａｌ ｔｅｍｐｅｒｔｕｒｅ ｗａｓ １５~３５． Tｈｅ ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｐｈａｓｅ ｏｆ ＢＲＪ２ ｗｅｒｅ ４~１３ｈ， ｐＨ ｗａｓ ｆｒｏｍ ４．５ ｔｏ ９．５， ａｎｄ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｇｒｏｗｔｈ ｔｅｍｐｅｒｔｕｒｅ ｗａｓ ３２． Ｗｈｅｎ ｄｅａｌｉｎｇ ｗｉｔｈ ｂｏｔｈ two ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｎ ｃｏｍｍｏｎ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ， ｔｈｅ ｎｅｕｔｒａｌ ｃｕｌｔｕｒａｌ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｓｕｃｈ ａｓ pＨ＝７．０ ａｎｄ ｔｅｍｐｅｒｔｕｒｅ ｗｅｒｅ ｒｅｑｕｉｒｅｄ． Ｉｎ ａｄｄｉｔｏｎ， Ｔｈｅ ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｒｎｉｎｇ ａｔ ｒｅｇｕｌａｒ ｉｎｔｅｒｖａｌｓ ｃｏｕｌｄ ｐｒｏｖｉｄｅ ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｘｙｇｅｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｏｕｒｓｅ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｃｈｉｎｅｓｅ ｃａｂｂａｇｅ； sｏｆｔ ｒｏｔ； aｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｓｔｒａｉｎｓ； ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ 　　 　　大白菜软腐病是一种由软腐欧文氏菌引起的土传病害［１，２］，为大白菜包心后期的主要病害，与霜霉病和病毒病并称为大白菜的三大病害。发病时可造成大白菜严重减产，个别地区可造成大白菜绝产；窖内储存时可引起全窖腐烂；在运输和销售的过程中均可发生腐烂，造成极大的经济损失［３］。 　　目前，在生产中防治大白菜抗软腐病主要采用选用抗病品种、改进栽培技术及使用化学药剂等方法［４，５］。这些方法虽然取得了一定的效果，但容易造成污染，且无法杜绝该病的发生。随着农业生产的发展，生物防治在植物病害防治工作中的作用越来越重要。直接利用颉颃菌来进行生物防治是近年来生物防治方向的研究热点之一［６-８］。目前应用较多的生防细菌主要有芽孢杆菌、假单胞杆菌、土壤放射杆菌等［９，１０］。如直接向土壤中添加有益颉颃菌，颉颃菌进入土壤后会与土著微生物产生营养竞争，从而抑制其扩增，表现不出其颉颃效果。因此本试验拟将颉颃菌首先接种于腐熟的有机堆肥中扩增制成生物有机肥后再施入土壤，利用颉颃菌对病原菌的攻击、竞争作用调节土壤中微生物间的平衡，抑制病原微生物的生长，从而抑制大白菜软腐病的发生。 　　本研究从软腐病发病植株原位土壤中筛选出高效、稳定的颉颃菌，并初步测定其发酵条件，为采用生物法防治大白菜软腐病研究提供有益的探讨。 　　１材料与方法