广西地方标准烟叶中角鲨烯含量定性和定量测定方法征求意见稿.doc.doc

ICS?点击此处添加ICS号 点击此处添加中国标准文献分类号 ????? DB45 广西壮族自治区地方标准 DB 45/T XXXX—XXXX ????? 烟叶中角鲨烯含量定性和定量测定方法 The qualitative and quantitative determination of tobacco squalene content 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 XXXX - XX - XX发布 XXXX - XX - XX实施 广西壮族自治区质量技术监督局???发布 前??言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2015给出的规则起草。 本标准由广西中烟工业有限责任公司提出。 本标准起草单位：广西中烟工业有限责任公司、中国烟草总公司广东省公司、华南农业大学。 本标准主要起草人： 烟叶中角鲨烯含量定性和定量测定方法 范围 本标准规定了烟叶中角鲨烯含量定性和定量测定方法。 本标准适用于烟叶中角鲨烯含量的测定。 本方法测定烟中角鲨烯的检出限0.12 mg/kg；定量限为0.40 mg/kg。 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 19616 烟草成批原料取样的一般原则 YC/T 31 烟草及烟草制品 试样的制备和水分测定 烘箱法 原理 以三氯甲烷为萃取溶剂，用超声波萃取试样中的角鲨烯，萃取液经固相萃取柱净化，用高效液相色谱仪/紫外检测器测定，由保留时间定性，外标法定量。 试剂 所有试剂应适用于化学分析，并应采用与样品测定（萃取和高效液相色谱法测定）相同的方法做空白实验以检查其纯度，空白溶剂色谱图的基线上应没有明显影响角鲨烯测定的峰出现。水应符合GB/T 6682 中一级水的规定。 角鲨烯标准品，纯度≥99.8%。 甲醇，色谱纯。 乙腈，色谱纯。 正己烷，分析纯。 三氯甲烷，分析纯。 标准溶液 角鲨烯标准储备液 准确称取0.10 g角鲨烯标准品（4.1），精确至0.10 mg，用乙腈(4.3)溶解后定容至100 mL棕色容量瓶，充分振荡摇匀，配制成1000 mg/L的角鲨烯标准母液。该标准储备液应在4℃冰箱内保存，有效期为3天。 一级标准溶液 准确移取5.00 mL标准储备液至100 mL棕色容量瓶中，用乙腈（4.3）定容至刻度。该一级标准溶液应在4℃ 角鲨烯系列标准工作溶液 分别准确移取0.10 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、5.00 mL、10.00 mL、20.00 mL一级标准溶液至50 mL棕色容量瓶中，用乙腈（4.3）定容至刻度。该系列标准工作溶液浓度依次为0.10 mg/L、0.50 mg/L、1.00 mg/L、2.00 mg/L、5.00 mg/L、10.00 mg/L和20.00 mg/L，其浓度范围应覆盖预计检测样品的含量。该系列标准工作溶液应在使用前配制。 仪器设备 高效液相色谱仪，配柱温箱和紫外检测器。 电子天平：感应量为0.1 mg。 旋转蒸发仪。 超声波振荡器。 固相萃取柱：硅胶柱（Welchrom，500 mg/6 mL）。 0.22 μm有机微孔滤膜。 容量瓶。 移液管。 微量进样器。 粉碎机孔径0.45 mm（40目）筛网。 试样的制备 按GB/T 19616抽取样品，按YC/T 31制备试样，并测定其水分。 样品处理 取试样1.0 g于50 mL中，向其中加入30 mL三氯甲烷4.5），，抽滤，准确L旋转蒸发至近干，用12 mL正己烷4.4）充分溶解，得正己烷提取液。用10 mL正己烷4.4）对固相萃取柱(5.5)进行预淋洗后，将正己烷提取液10 mL正己烷4.4）洗脱，用2 mL乙腈4.3）溶解，过0.22 μm有机系滤膜5.6），滤在4保存内测定。 以下色谱分析条件可供参考，如采用其它条件应验证其适用性： 色谱柱：内径4.6 mm，柱长250 mm，固定相为C18，填料粒度为5 μm； 柱温：30℃； 流动相：甲醇/乙腈=75/25（v/v，使用前超声15 min）； 流动相流速：1 mL/min； 检测波长为：210 nm； 进样量：10 μL； 分析时间约为35 min。 典型色谱图参见附录A。 标准工作曲线的制作 对系列标准工作溶液（4.6.3）进行高效液相色谱测定，由保留时间定性，外标法定量。以标准工作溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标建立标准工作曲线，工作曲线的线性相关系数大于0.9980。 每测定20次样品后，应加入1个中等浓度的标准工作溶液，如测得的值与原值相对偏差超过3%，应重新制作标准曲线。 测定 按与