23第二十三章 免疫细胞及其功能检验技术PPT.pptVIP

未转化淋巴细胞 转化的淋巴母细胞 转化率（％） ＝ 转化的淋巴细胞数 计数的淋巴细胞总数 X100％ 培养液 3H-TdR PHA 淋巴细胞 抗凝全血 分离液 离心 过滤 测量放射性 3H-TdR掺入法 灵敏度高 客观性好 原理： 外周血T细胞 PHA 发生增殖 MTT 含蓝色甲颗粒 的T细胞 MTT PHA 有机溶剂 测吸光度（A）值 计算SI判定细胞增殖结果 (SI≧2具有意义) MTT法 操作简便 无放射污染 51Cr释放法 淋巴细胞（CTL） + 含51Cr 的肿瘤细胞 肿瘤细胞破坏 51Cr 释放 测定γ射线 CTL介导的细胞毒试验 原理 根据T细胞活化的双识别原理，用生物工程技术将MHC分子在体外组装，并结合抗原表位肽，形成抗原肽-MHC分子复合物，结合流式细胞仪定量检测抗原特异性T细胞。 T MHC-抗原肽四聚体技术 MHC-肽四聚体技术 淋巴细胞内细胞因子检测 实验原理: 用刺激剂体外激活淋巴细胞，用蛋白转运抑制剂如莫能霉素阻止细胞因子分泌到细胞外，细胞内蛋白质转运方式被打乱，引起细胞因子向高尔基体积聚，用流式细胞仪测定淋巴细胞内的细胞因子种类，确定Th1/ Th2细胞的百分率。 分泌的细胞因子 Thl Th2 IL-2 ++ - IFN-γ ++ - TNF-β ++ ++ IL-3 + ++ GM-CSF + ++ TNF-α - ++ IL-4 - ++ IL-5 - ++ IL-6 - ++ IL-10 - ++ Thl和Th2分泌的细胞因子 二、B细胞数量及功能检测 （一）B细胞数量检测 根据B细胞表面标志进行检测： （1） mIg的检测：免疫荧光、免疫组化 （2） CD分子的检测： 检测CD19、CD20、CD21、CD22、 CD29以及CD5等 （3）小鼠红细胞受体的检测：花环试验 （二）B细胞功能检测 B细胞增殖试验：3H-TdR掺入法、MTT法 （刺激物：小鼠用LPS；人用SPA的金黄色葡萄球菌菌体或抗IgM抗体） B细胞抗体产生能力检测：溶血空斑试验、ELISPOT 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 免疫学检验 第二十三章免疫细胞及其功能检验技术 单个核细胞和淋巴细胞及其亚群的分离纯化原理。 T细胞及其亚群的表面标志和功能检测。 B细胞功能检测的方法和原理。 NK细胞的表面标志及其功能检测方法。 中性粒细胞和巨噬细胞的功能检测。 本章要点 目　录 免疫细胞的分离与纯化 1 淋巴细胞数量及功能检测 2 吞噬细胞功能检测 3 免疫细胞是指参与免疫应答或与免疫应答相关的细胞，主要包括淋巴细胞、单核-巨噬细胞和树突状细胞等。 通过分离、纯化免疫细胞及其亚群，并对其数量和功能测定，可以判断机体免疫功能状态，对指导临床实践和科学研究具有重要意义。 前 言 一、白细胞的分离 （一）自然沉降法 加抗凝血于试管中 室温或37℃中静置 （30-60min） 分层 结果示意图 （二）高分子聚合物沉降法