电泳法和高效毛细管电泳法培训.pptVIP

第10章 电泳法和高效毛细管电泳法;;;10.1.2 毛细管电泳的原理;第10章电泳法和高效毛细管电 10.1.3 分离模式;第10章 毛细管电泳 10.1.3 分离模式1 毛细管区带电泳（CZE） ;第10章 毛细管电泳 10.1.3 分离模式2 胶束电动毛细管色谱;胶束电动色谱的应用特点: 使毛细管电泳不仅能分离离子化合物，而且还能分离中性化合物. 比高效液相色谱更为高效. HPLC 分离柱效为5000－25000理论板数/m MECC 可达到50000－500000理论板数/m 比高效液相色谱更为高速.MECC分离时间通常小于30min，但达到相仿效率的毛细管LC，需要更长的时间。 ;第10章 毛细管电泳 10.1.3 分离模式3 毛细管凝胶电泳;毛细管凝胶电泳的特点： 综合了电泳技术和平板凝胶电泳的优点 ， 电泳峰尖锐，柱效极高 短柱上实现极好的分离 试样容量为10－12g 主要缺点:制备柱较困难，寿命较短 已成为分离分析生物大分子如蛋白质、多肽、核酸、DNA等强有力的工具。例应用CGE分离与激光诱导荧光检测相结合，用于DNA序列快速分析。 ;第10章 毛细管电泳 10.1.3 分离模式5 毛细管电色谱;第10章 毛细管电泳 10.1.3 分离模式6 毛细管等电聚焦;等速电泳所要求的条件: ;区带电泳和等速电泳使用的电解质溶液的不同; 2. 背景电流要小到足以克服区带电泳效应 在毛细管等速电泳中, 由于没有一个背景电解质支持电流 (毛细管等速电泳要求溶剂的自身电导可以忽略不计 ), 各区带互相连接. ;;毛细管等速电泳一般用恒流操作模式.分离开始后, 在电压的作用下, 各组分由于淌度的不同被分离. ;第10章 毛细管电泳 10.2.3 理论效率及表示方法 ;; ⑴高压电源:0-30kv连续可调的直流高压电源 ⑵毛细管柱： 内径25-75μm,常用50和75μm 材料：石英为主，长度30-70cm, 凝胶柱20cm左右。 ;（3） 进样方法 Ⅰ 电动力学进样 也称电迁移进样.; 样品;(4 ) 检测器;(4 ) 检测器;10.4 毛细管电泳在医药中的应用; A 对照品的电泳图谱 B 样品的电泳图谱 （背景电解质：20mmol/I 硼砂缓冲溶液(含10％乙醇) ，pH 9.0）Agilent HP3DCE高效毛细管电泳仪(德国)； 未涂层弹性石英毛细管柱50 ×75μm，有效长度为43cm压力进样(5 s)，分离电压为25 kV，分离温度为25℃，检测波长为206nm.;仪器：高效毛细管电泳-二极管阵列检测器(HPCE-DAD) 毛细管柱长度58．5cm×75 μm，分离电压25 kv， 进样量3.5 kPa×8s，分离温度25℃， 缓冲溶液20mmol/L柠檬酸+40 mmol/L磷酸氢二钠(pH 2.6)，检测波长232nm。线性范围: 1一100 mg／L； 牛奶和奶粉的定量限分别为0.5 mg/kg和1.0mg/kg;