《论文_分子生物学论文基因治疗与基因诊断的研究与发 展(定稿)》.docVIP

分子生物学论文 基因治疗与基因诊断的研究与发展摘要：基因诊断与基因治疗能够在比较短的时间从理论设想变为现实，主要是由于分子生物学的理论及技术方法，特别是重组 DNA 技术的迅速发展，使人们可以在实验室构建各种载体、克隆及分析目标基因。所以对疾病能够深入至分子水平的研究，并已取得了重大的进展。因此在 20 世纪 70 年代末诞生了基因诊断 随gene diagnosis； 后 于 1990 年美国实施了第一个基因治疗gene therapy的临床试验方案。可见，基因诊断和基因治疗是现代分子生物学的理论和技术与医学相结合的范例。关键词：基因治疗 基因诊断 重组 DNA1．引言 20 世纪后半叶以来，由于分子生物学的崛起，人们进入了合成代谢与代谢调节的研究。这一阶段，细胞内两类重要的生物大分子---蛋白质与核酸，成为研究焦点。20 世纪 50 年代初期发现了蛋白质的α螺旋的二级结构形式；更具里程碑意义的是 1953 年提出的 DNA 双螺旋结构模型，为揭示遗传信息传递规律奠定了基础，是生物化学发展进 入分子生 物学时期的重要标志。 20 世纪 70 年代，重组 DNA 技术的建立不仅促进了对基因表达调控机制的研究，使基因操作无所不能，而且使人们主动 改造生物 体成为可能。基因诊断和基因治疗也是重组 DNA 技术在医学领域应用的重要方面。 随着对各种疑难疾病的深入研究，和分子生物学日新月异的发展，传统的诊断治疗手段无法解决的一些重要问题。通过对 生物体在 分子水平上的研究，基因诊断与治疗的作用逐渐显露出来，尤其是许多遗传疾病。 传统对疾 病的 诊断主 要是以 疾病的 表型 改变为 依据， 如患者 的症状、血尿各项指标的变化，或物理检查的异常结果，然 而表型的 改变在许多情况下不是特异的，而且是在疾病发生的一定时间后 才出现， 因此常不能及时作出明确的诊断。现知各种表型的改变是由基因 异常造成 的，也就是说基因的改变是引起疾病的根本原因。基因诊断是指 采用分子 生物学的技术方法来分析受检者的某一特定基因的结构（DNA 水平）或功能（RNA水平）是否异常，以此来对相应的疾病进行诊断。基因 诊断有时 也称为分子诊断或 DNA 诊断DNA diagnosis。基因诊断是病因的诊断，既特异又灵敏，可以揭示尚未出现症状时与疾病相关的基因状态， 从而可以 对表型正常的携带者及某种疾病的易感者作出诊断和预测，特别 对确定有 遗传疾病家族史的个体或产前的胎儿是否携带致病基因的检测具有指导意义。 2．基因诊断的原理与方法 2.1 基因诊断的原理 疾病的发生不仅与基因结构的变异有关，而且与其表达功能异常有关。基因诊断的基本原理就是检测相关基因的结构及其表达功能特别是RNA 产物是否正常。由于 DNA 的突变、缺失、插入、倒位和基因融合等均可造成相关基因结构变异，因此，可以直接检测上述 的变化或 利用连锁方法进行分析，这就是 DNA 诊断。对表达产物 mRNA 质和量变化的分析为 RNA 诊断RNA diagnosis。 2.2 基因诊断的方法 基因诊断是以核酸分子杂交nucleic acid molecular hybridization和聚合酶链反应（PCR）为核心发展起来的多种方法，同时配合 DNA 序列分析，近年新兴的基因芯片可能会发展成为一种很有用的基因诊断方法。 DNA 诊断 常用检测致病基因结构异常的方法有下列几种。 ⑴斑点杂交：根据待测 DNA 样本与标记的 DNA 探针杂交的图谱，可以判断目标基因或相关的 DNA 片段是否存在，根据杂交点的强度可以了解待测基因的数量。 ⑵ 等 位 基 因 特 异 的 寡 核 苷 酸 探 针 （ allele-specific oligonucleotideprobe ASO probe）杂交：是一种检测基因点突变的方法，根据点突变位点上下游核苷酸序列，人工合成约 19 个核苷酸长度的片段，突变的碱基位于当中，经放射性核素或地高辛标记后可作为探针，在严 格杂交条 件下，只有该点突变的 DNA 样本，才出现杂交点，即使只有一个碱基不配对，也不可能形成杂交点。一般尚合成正常基因同一序列，同一 大小的寡 核苷酸片段作为正常探针。如果受检的 DNA 样本只能与突变 ASO 探针，不与正常ASO 探针杂交，说明受检二条染色体上的基因都发生这种突变，为突变纯合子；如果既能与突变 ASO 探针又能与正常 ASO 探针杂交，说明一条染色体上的基因发生突变，另一条染色体上为正常基因，为 这种突变 基因的杂合子；如果只能与正常 ASO 探针杂交，不能与突变 ASO 杂交，说明受检者不存在该种突变基因，如图 21-1 所示。 即 若与 PCR 方法联合应用， PCR/ASO 探针杂交法PCR/ASO probehybridizat