变性的核糖核酸酶之复性.pptVIP

p.142 圖4-21(續) p.142 圖4-21(續) p.143 蛋白質四級結構範圍包括從簡單之二聚體到巨大之複合體 一個多次單元體蛋白質也稱為多聚體（multimer）。多聚體蛋白質可能有兩個至上百個次單元體。僅有少許次單元體的多聚體經常被稱為寡聚體（oligomer）。 這些在多聚體蛋白質中的重複性結構單元，不論是單一次單元體或是一群次單元體，都被稱為原聚體（protomer）。 血紅素的次單元體是以對稱配對方式排列的（圖4-22），每個配對含有一個 α與一個 β 次單元體。 p.143 圖4-22 圖4-22　去氧血紅素之四級結構。（PDB ID 2HHB）針對去氧血紅素（沒有氧分子結合到血基團上的血紅素）所作的 X-光繞射分析可顯示其四個多次單元體是如何組裝在一起的。(a) 緞帶表示法。(b) 空間填充模型。α 次單元體以灰色表示，β 次單元體則以紫色表示。請注意血基團（紅色）彼此間隔很遙遠。 總結 4.3 三級結構是肽鏈完整的三度空間結構。蛋白質基於三級結構可分為兩大類：纖維狀與球狀。 纖維狀蛋白質主要扮演結構性角色，是由簡單且重複性的二級結構元素組成。 球狀蛋白質具有較複雜的三級構造，通常在同一條多肽鏈中就包含了多種二級結構。第一個利用 X-光繞射法測定出來的球狀蛋白質結構是肌紅蛋白。 p.145 球狀蛋白質的複雜結構可藉由研究超二級結構、模體或摺疊等穩定的次結構進一步加以分析。數以千計已知的蛋白質結構一般都是僅由數百種模體組合而成的。多肽鏈中可以穩定且獨立摺疊的區域稱為區塊。 四級結構是多次單元體（多聚體）蛋白質或大型蛋白質組合中次單元體之間交互作用所造成的結果。有些多聚體蛋白質是由單一次單元體或一群次單元體等原聚體形成的重複性單元所組成。這些原聚體通常彼此會形成轉動或螺旋對稱相關。二級結構是一段多肽鏈中胺基酸殘基的規則排列方式，其中每個殘基與其空間上相鄰的其他殘基均採取相同的排列方式。 p.145 4.4　蛋白質變性與摺疊 p.145 所有蛋白質開始時都是以一條由胺基酸殘基組成的線性序列，出現在核糖體上。 蛋白質結構喪失會造成功能喪失 足以造成蛋白質功能喪失的三度空間結構改變稱為變性（denaturation）。變性狀態不必然等同於蛋白質的完全未摺疊或構形的混亂。 p.145 如果溫度是緩慢上升的，蛋白質的構形通常會持續維持完整，直到其結構（與功能）在一狹窄的溫度變化範圍內突然地喪失為止（圖 4-25）。 蛋白質不僅可藉由加熱而變性，也可以藉由極端的 pH 值、特定可互溶的有機溶劑（如酒精或丙酮）、特定溶質（如尿素與鹽酸胍），或是清潔劑而變性。 p.146 圖4-25(a) p.146 圖4-25　蛋白質變性。本圖所示為蛋白質經由兩種不同環境因子改變造成變性之結果。在任一種情況中，由摺疊到未摺疊狀態的轉換是非常急遽的，顯示蛋白質未摺疊的過程是具有協同性的。(a) 馬肌紅蛋白原（不含血基質輔基之肌紅蛋白）與核糖核酸酶 A（雙硫鍵未破壞；見圖 4-26）之熱變性實驗。變性過程溫度顯著變化範圍之中點即稱為熔化溫度，或 Tm 值。肌紅蛋白原之變性是以圖二色偏光光譜儀（見圖4-9）測量此巨分子 α-螺旋含量變化所得的。核糖核酸酶 A之變性則是以測量蛋白質變性過程中內部色胺酸殘基因微環境改變而產生之螢光變化的情形。 圖4-25(a) p.146 圖4-25(b) 圖4-25　蛋白質變性。 (b) 以鹽酸胍（GdnHCl）對雙硫鍵未破壞的核糖核酸酶 A 進行之變性實驗，變性過程以圓二色偏光光譜儀測量。 p.146 胺基酸序列決定三級結構 某些球狀蛋白質經由加熱、極端 pH值，或變性試劑的作用後，當環境回復到可使自然構形穩定的條件時，可重獲其天然結構與生物活性。此過程稱為復性（renaturation）。 有一個傳統著名的實例就是核糖核酸酶 A 的變性與復性，由 Christian Anfinsen 在 1950 年代完成。 p.146 圖4-26 圖4-26　未摺疊、變性的核糖核酸酶之復性。尿素被用來使核糖核酸酶變性，硫氫基乙醇(HOCH2CH2SH）用來還原並打斷雙硫鍵以產生 8 個半胱胺酸殘基。復性過程包含正確雙硫鍵交叉聯結之重建。 p.147 多肽以階段性步驟作快速摺疊 蛋白質摺疊不可能是一個完全隨機的試誤過程，一定有捷徑的存在。 其一是，摺疊過程被視為層級式的。某些胺基酸序列易摺疊為 α 螺旋或 β 摺板，是由我們先前在二級結構中所討論到的幾點限制所引導的。 在另一個可能的模型中，摺疊是由一個自發性的崩解開始，透過非極性殘基間的疏水性交互作用力將多肽摺疊為緊密狀態。 p.146 圖4-27 圖4-27　模擬的摺疊途徑。絨毛蛋白（一種會與肌動蛋白結合，主要發現於小腸微絨毛中的蛋白