一显微镜的使用及微生物形态的观察.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * (4)复发酵试验：用无菌接种环挑取上述涂片镜检显示革兰氏阴性无芽孢杆菌的菌落的另一部分接种于已灭菌的装有10mL普通浓度乳糖蛋白胨培养基的小发酵管(内有倒管)中，每管可接种分离自同一初发酵管或发酵瓶的最典型的菌落1-3个，然后置于37℃恒温箱中培养18-24h，有产酸产气者(不论倒管内气体多少皆作为产气论)，即证实大肠菌群存在。 水样接种 初步发酵 产酸产气 大肠菌群 厌氧芽孢杆菌 好氧芽孢杆菌 大肠菌群 好氧芽孢杆菌 阳性管 大肠菌群 革兰氏阴性无芽孢 革兰氏染色 产生 典型菌落 鉴别培养基 平板分离 产酸产气 复发酵 大肠菌群的检验步骤方框图： 原理：本试验采用标准平皿法对水样中细菌作计数，这是测定水中好氧和兼性厌氧异养细菌密度的方法。由于细菌在水体个能以单独个体、成对、链状、成簇或成团的形式存在，此外没有单独的一种培养基或其一环境条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求，所以由此法所得的菌落数实际上要低于被测水样中真正存在的活细菌的数目。 (二)细菌总数的测定 （水源水，倾倒法） 制作培养基平板 定量接种水样 37℃下培养18－24h 计数菌落 倾倒法 步骤：(1)水样稀释。(2)根据水样的洁净程度，污染严重者选取10-2、10-3、10-4三个连续稀释度，中等的选取10-1、10-2、10-3三个连续稀释度。稀释度的选择是本试验精确度的关键，选择适宜者，平皿上菌落总数介于30和300之间。(3)吸取由高倍至低倍的稀释液，每个稀释液分别注入两个培养皿，每皿1mL。注入彻底融化，然后冷却到45℃的营养琼脂培养基约15mL，立即旋摇培养皿，充分混匀。方法是握住平皿，先往一个方向画圆，再朝相反方向回转；或一面画圆，一面适当倾斜。小心勿使这个混合液体溅到培养皿的边缘。让平皿培养基于水平位置放置至固化后倒置于37℃生化箱中培养18-24h，观察结果。 菌落计数及报告方法：作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用。而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀。则可将此平皿计数后乘 2 以代表全皿菌落数。 各种不同情况的计算方法 ： (1)首先选择平均菌群数在30-300之间者进行计算。当只有一个稀释度的平均菌落符合此范围时，则即以该平均菌落数乘其稀释倍数报告之。 (2)若有两个稀释度，其平均菌落数均在30-300之间，则应按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2应报告两者的平均数，若大于2则报告其中较小的菌落总数。 (3)若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 (4)若所有稀释度的平均菌落数均小于300，则应按稀释度最低的平均茵落数乘以稀释倍数报告之。 (5)若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 六、思考题 1、测定大肠菌群数说明什么问题？为什么要用 大肠菌群作检验指标? 2、测定细菌总数说明些什么? 3、为什么乳糖蛋白胨培养基用0.7kg/cm2 灭菌，而不用1kg/cm2 20miｎ？ 4、作了细菌检验，为什么自来水厂还要经常进行余氯的测定? 5、根据我国饮用水水质标准，讨论这次检验的结果？ 一、目的与要求 1、掌握藻类形态特征及观察方法。 2、认识藻类及其主要门的主要特征，并了解藻类 在系统分类中的进化地位。 实验十 藻类形态观察 二、材料和用品 1、自备材料： 地木耳、水绵、紫菜、海带、轮藻、平菇或磨菇新鲜标本或市售干品；根霉、酵母菌、青霉、曲霉的培养材料； 2、其它材料和用品：上述材料的显微制片、发网菌变形体永久制片、 发网菌孢子囊永久制片、硅藻制片；蘑菇、 猴头、灵芝、 鬼伞、 马勃、大秃马勃、 竹荪、 鬼笔等的担子菌子实体的浸制标本。显微镜、解剖器、擦镜纸、吸水纸、载玻片、盖玻片、培养皿、烧杯、滴瓶、 滴管等。 三、实验内容 藻类观察 四、实验方法与实验举例 1、?蓝藻门（Cyanophyta）：念珠藻属（Nostoc） 本属亦为常见蓝藻，在山坡草地上经常可发现蓝黑色皮膜状或蓝绿色粘滑木耳状的念珠藻属植物，此为地木耳（N. commue）(俗名又叫地皮菜、地达菜、葛仙米)。肉眼所见到的木耳状的胶质片状体或胶团是它的群体。标本采回后可晾干保存，实验前2小时将其用清水浸泡，然后装镜观察。实验