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第十三章　细菌的生物化学试验 ? 　　本章考点：　　1.碳水化合物的代谢试验　　（1）糖（醇、苷）类发酵试验　　（2）氧化一发酵试验（O／F试验）　　（3）β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）　　（4）七叶苷水解试验　　（5）甲基红试验　　（6）V-P试验　　2.蛋白质和氨基酸的代谢试验 　　（1）明胶液化试验　　（2）吲哚（靛基质）试验　　（3）硫化氢试验　　（4）尿素分解试验　　（5）苯丙氨酸脱氨酶试验　　（6）氨基酸脱羧酶试验　　3.碳源和氮源利用试验 　　（1）枸橼酸盐利用试验　　（2）丙二酸盐利用试验　　4.各种酶类试验 　　（1）氧化酶试验　　（2）过氧化氢酶试验（触酶试验）　　（3）硝酸盐还原试验　　（4）脂酶试验　　（5）卵磷脂酶试验　　（6）DNA酶试验　　（7）凝固酶试验　　（8）CAMP试验　　（9）胆汁溶菌试验　　5.抑菌试验 　　（1）O／129抑菌试验　　（2）杆菌肽试验　　（3）奥普托欣（Optochin）试验　　6.复合生化试验　　（1）KIA试验　　（2）MIU试验　　不同细菌具有各自独特的酶系统，因而对底物的分解能力各异，其代谢的产物也不相同。这些代谢产物又各具有不同的生物化学特性，为此，可利用生物化学的方法测定这些代谢产物以鉴定细菌。在临床细菌检验工作中，除根据细菌的形态、染色、培养特性进行初步鉴定外，对绝大多数分离的未知菌的属、种鉴定，主要通过这些生物化学试验。　　　　一、碳水化合物的代谢试验　　其原理为：由于细菌各自具有不同的酶系统，对糖的分解能力不同，有的能分解某些糖产生酸和气体，有的虽能分解糖产生酸，但不产生气体，有的则不分解糖。据此可对分解产物进行检测从而鉴别细菌。具体试验方法有：①糖类发酵试验；②葡萄糖代谢类型鉴别试验；③七叶苷水解试验；④淀粉水解试验；⑤甲基红试验；⑥V-P试验；⑦β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）。　　1.糖（醇、苷）类发酵试验　　（1）原理：由于各种细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，故分解糖类的能力各不相同，细菌分解糖类后的终末产物亦不一致，有的产酸、产气，有的仅产酸，故可利用此特点以鉴别细菌。　　（2）培养基：在培养基中加入0.5%～l%的糖类（单糖、双糖或多糖）、醇类（甘露醇、肌醇等）、苷类（水杨苷等）。　　（3）方法：将分离的纯种细菌，以无菌操作接种到糖（醇、苷）类发酵培养基中，置培养箱中培养数小时至两周后，观察结果。若用微量发酵管，或要求培养时间较长时，应保持湿度，以免培养基干燥。　　（4）结果：接种的细菌，若能分解培养基中的糖（醇、苷）类产酸时，培养基中的指示剂呈酸性反应。若产气可使液体培养基中倒管内或半固体培养基内出现气泡，固体培养基内有裂隙等现象。若不分解，培养基中除有细菌生长外，无任何其他变化。　　（5）应用：是鉴定细菌最主要和最基本的试验，特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。　　2.氧化-发酵试验（0/F试验）　　（1）原理：利用此试验可区分细菌的代谢类型。　　　　（2）培养基：HL（Hugh-Leifson）培养基。　　（3）方法：将待检菌同时穿刺接种两支HL培养基，其中一支培养基滴加无菌的液体石蜡（或其他矿物油），高度不少于lcm。将培养基于35℃培养48h或更长。　　（4）结果：　　 　 开管 封闭管 产碱型 - - 氧化型 + - 发酵型 + + 　　（5）应用：主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴别，前者均为发酵型，而后者通常为氧化型或产碱型。也可用于葡萄球菌与微球菌间的鉴别，前者是发酵型，后者是氧化型。　　3.β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）　　（1）原理：　　　　（2）试剂：0.75M ONPG溶液。　　（3）方法：从克氏双糖铁培养基上取菌，于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液，加入一滴甲苯并充分振摇，使酶释放。将试管置37℃水浴5min，加入0.25ml ONPG试剂，水浴20min～3h观察结果。　　（4）结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在20～30min内显色。　　（5）应用：迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。本实验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。　　4.七叶苷水解试验　　（1）原理：　　　　（2）培养基：七叶苷培养基、胆汁七叶苷培养基。　　（3）方法：将待检菌接种于七叶苷培养基中，培养后观察结果。　　（4）结果：培养基变为黑色为阳性，不变色者为阴性。　　（5）应用：主要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别，前者阳性，后者阴性。　　5.甲基红试验　　（1）原理： 　　　　（2）培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。　　（3）方法：将待检