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阪崎肠杆菌研究进展 龙道崎、邹妍、关郁芳、雷丹丹、边伟、胡鹏 目录 概述 检测方法 致病性 预防和控制 生物学特性 阪崎肠杆菌概述 阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)属肠杆菌科，是人和动物肠道内寄生的一种周生鞭毛、能运动、无芽孢的革兰氏阴性菌，一直以来被称为黄色阴沟肠杆菌 (Enterobacter cloacae)，于1980年以日本细菌学家 Riichi Sakazakii的名字命名。 阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎和败血症，近年来受到了研究者的广泛关注 生物学特性 阪崎肠杆菌属肠杆菌科肠杆菌属，具备肠杆菌基本形态特征：革兰阴性粗短杆菌，细胞大小为(0.6～1.1)×(1.2～3.0)um，有周身菌毛，无芽胞 形态特征 生物学特性 菌落培养特性 不高，能在普通营养琼脂、血平板、麦康凯(MAC)琼脂、伊红美兰(EMB)琼脂、脱氧胆酸琼脂等多种培养基上生长繁殖。 在外界环境中比其他肠道杆菌生存率强，培养最佳温度25—36℃，在6～45℃下都能生长 营养要求 培养温度 生物学特性 阪崎肠杆菌与阴沟肠杆菌有31％～49％的DNA序列同源性，G+C含量为57％ 生理生化特性 阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶表现为阳性, 并缺少磷酰胺酶活性（区别于其它肠杆菌） 具有产生吐温-80酯酶的能力(鉴定依据) 阪崎肠杆菌还具有氧化酶阴性、过氧化酶阳性、D-山梨醇阴性和细胞外DNAse阳性等多种特征。 抗性 生物学特性 耐干燥、渗透压 耐酸性 原因：阪崎肠杆菌细胞内含有大量的海藻糖酶，累积有大量的海藻糖，使得阪崎肠杆菌比其他肠杆菌更耐受渗透压和干燥。 实验表明阪崎肠杆菌能在pH 0.9～2下存活 原因：可能与阪崎肠杆菌周身菌毛结构有关，菌毛结构易使细菌形成共生集合体，粘附在物体表面形成一层生物保护膜 检测方法 细菌学分离培养方法 分子生物学方法 经典方法：MPN计数法 改良法：XαGLC选择性显色培养基法 改良法：荧光选择性鉴别培养基法 PCR方法 实时荧光定量PCR方法 XαGLC选择性显色培养基法 α-葡萄糖苷酶水解XαGLC，释放糖苷配基5-溴-4-氯-吲哚，该糖苷配基在氧存在时形成色素溴-氯-吲哚，使菌落呈现特异性蓝绿色。 在胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）培养基中加入了5-溴-4-氯-吲哚-α-D-吡喃葡萄苷(XαGLC)作为发色基团，组成显色培养基（称为DFI琼脂）。 利用阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶活性的检测方法 原理 实时荧光定量PCR技术 探针可以与目的DNA片段特异地互补结合 探针的一端标记荧光基团，另一端标记淬灭基团 在探针未被DNA聚合酶破坏时，后者可以吸收前者的荧光；探针被破坏，淬灭基团不能吸收荧光基团所发荧光 利用检测器检测荧光强度 通过标准曲线进行定量分析 基本原理是在PCR反应体系中加入一种探针 分布及受污染食品 阪崎肠杆菌在自然界分布广泛，早在1974年从水，土壤、植物根茎、下水道、动物和人类排泄物中分离到阪崎肠杆菌。 婴儿配方奶粉是新生儿阪崎肠杆菌感染的主要感染源 阪崎肠杆菌的污染调查：分别从饼干巧克力类、方便面类、谷物类、儿童食品类、干果类和其他类食品中检出阪崎肠杆菌。 阪崎肠杆菌不仅存在于奶粉中，而且在其它食品也存在 阪崎肠杆菌的致病性 阪崎肠杆菌是存在自然环境中的一种“条件致病菌”，由其引发的危害人群主要是婴儿以及早产儿。偶尔还可引起成人局部感染。 阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、菌血症和坏死性小肠结肠炎，并可能遗留严重的神经系统后遗症，死亡率20％～50％。 致病机制研究不多，尚不清楚。 目前所知阪崎肠杆菌致病性可能与肠毒素和内毒素有关 细菌内毒素（脂多糖），是构成革兰氏阴性细菌细胞外壁的主要成分。具有热稳定性，能增加小肠上皮细胞通透性，促使细菌侵入肠壁中而致病。 阪崎肠杆菌的毒力因子可能是一类肠毒素样化合物。在组织培养过程中一些菌株产生细胞毒效应，且菌株间的毒力作用有差异。 阪崎杆菌的致病性 预防与控制 坚持母乳喂养 选择检查合格的奶粉 开水冲调婴幼儿配方食品，再次食用前应重新加热。 制定婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌微生物标准 制定加工、使用和操作婴幼儿配方食品的导则 制定有效的环境监测计划 建立实验室监测网络，对阪崎肠杆菌的来源、传播途径 等进行调查研究 控制 预防 谢谢！ 请各位指正与提问