18 基因诊断与基因治疗PPT.ppt

基 因 诊 断 与基 因 治 疗;基因诊断的概念;基因诊断的分子生物学基础;基因诊断的途径;基因诊断的对象;基因诊断的运用;PCR技术的发明及特点;PCR技术的进展 ;PCR的微量化 反应体积减少至10-20μl，降低了PCR检测的成本。在1次PCR中加入多对引物，可用于病毒、细菌等的分型和多种病原体基因的检测。PCR扩增产物，用专为检测双链DNA而设计的微量荧光计定量，就可从标准模板DNA的量或拷贝数达到PCR定量的目的。 取样技术的改进 对于产前诊断，初期是取羊水细胞，需进行细胞培养。从1982年起采取妊娠8-12周的绒毛DNA作产前诊断使产前基因诊断的时间提前。由于PCR技术的应用，甚至在胚胎植入前(受精6d)也可作产前诊断。;反向遗传学策略 过去寻找致病基因是从经典遗传学思路出发，先发现疾病的表现改变，再经过不同方法由表型追溯到基因。 近几年来发展起来的“反向遗传学”(reverse genetics)在策略上解决了经典遗传学所不能解决的这个难题。在不知道和不必知道基因产物或表型的情况下分离和定位致病基因，并由它的一级结构推出产物的氨基酸序列。 方法：须先采用细胞遗传学方式或RFLP连锁分析确定致病基因在染色体上的大概位置，然后采用染色体步移（chromosome walking）或染色体跳跃（chromosome hopping）技术逐渐接近，最后找到的基因的准确位置。 成功例子：如Duchenne肌营养不良和囊性纤维变等致病基因的发现；预计亨廷顿舞蹈病、神经纤维瘤、多发性肠息肉和成人型多囊肾等疾病的致病基因，不久可望用此策略得以确定。 ;核酸杂交概念;核酸杂交分类;核酸探针的标记和检测 ;核酸分子杂交方法 ;基因芯片概念;基因芯片的原理及用途;基因芯片应用;扩增片段长度多态性;等位基因的特异寡核苷酸探针诊断法;单链构象多态性诊断法;基因诊断的质量控制;基因诊断的应用;基因诊断的意义;基因治疗 (Gene Therapy)的概念;基因治疗的潜力 ;18岁的格尔辛基（Jesse Gelsinger）因临床试验的某些失误而于1999年9月17日死亡。格尔辛基是世界上首位由基因治疗导致丧生的患者。他患先天性鸟氨酸甲酰氨基转移酶（OTC）缺乏症（X连锁性遗传病）病症，在男性身上较严重，往往引起新生男婴患者的死亡。 2006年7月24日,来自伊利诺斯州的一名36岁女患者，为了治疗自己的风湿性关节炎而采用基因治疗的方法,在一条腿的膝盖部位注射了药剂结果死亡,该公司也被迫关闭。 ;基因治疗的前景分析 基因治疗是将具有治疗价值的基因，即“治疗基因”装配于带有在人体细胞中表达所必备元件的载体中，导入人体细胞，直接进行表达。进行基因治疗时毋须对表达产物进行分离纯化，因为人细胞本身可以完成这个过程。;可大大降低治疗成本。因为基因治疗不需要基因工程中耗资最大的器材与材料费用，显著降低了工业化的成本。 基因工程的“目的基因” 往往不能有效地进入细胞而不能备应用于基因工程。但基因治疗不受上述限制。具有治疗作用，理论上均可应用于基因治疗。因此，基因治疗具有更大的潜力。;基因治疗则必须将基因直接导入人体细胞，不仅在技术上具有很大难度，而且在有效性于安全性方面提出了风为苛刻的要求。 基因治疗仅有10年的历史，不少技术还不够成熟。所以，它所遇到的风险性更大。 ;基因治疗的策略;基因修饰（gene augmentation）又称基因增补，将目的基因导入病变细胞或其它细胞，目的基因的表达产物能修饰缺陷细胞的功能或使原有的某些功能得以加强。在这种治疗方法中，缺陷基因仍然存在于细胞内，目前基因治疗多采用这种方式。如将组织型纤溶酶原激活剂的基因导入血管内皮细胞并得以表达后，防止经皮冠状动脉成形术诱发的血检形成 基因失活（gene inactivation）：利用反义技术能特异地封闭基因表达特性，抑制一些有害基因的表达，已达到治疗疾病的目的。如利用反义RNA、核酶或肽核酸等抑制一些癌基因的表达，抑制肿瘤细胞的增殖，诱导肿瘤细胞的分化。用此技术还可封闭肿瘤细胞的耐药基因的表达，增加化疗效果。;免疫调节（immune adjustment）：将抗体、抗原或细胞因子的基因导入疾人体内，改变病人免疫状态，达到预防和治疗疾病的目的。如将白细胞介素-2导入肿瘤病人体内，提高病人IL-2的水平，激活体内免疫系统的抗肿瘤活性，达到防治肿瘤复发的目的。 其它： 增加肿瘤细胞对放疗或化疗的敏感性：采用给予前体药物的方法减少化疗药物对正常细胞的损害。如向肿瘤细胞中导入单纯疱疹病毒胸苷激酶基因，然后给予病人无毒性GCV药物，由于只有含HSV-TK基因的细胞才能将CGV转化成有毒的药物。因而肿瘤细胞被杀死，而对正常细胞无影响。 耐药基因治疗：将产生抗药物毒