动物源食品中β-受体激动剂的检测2.ppt

动物源食品中β-受体激动剂的检测 福建省产品质量检验研究院 现有检测方法 ?胶体金免疫法 GC-MS HPLC HPLC-MS/MS GB/T22286-2008 动物源性食品中多种β - 受体激动剂残留量的测定 液相色谱串联质谱法 GB/T21313-2007 动物源性食品中β-受体激动剂残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 GB/T5009.192-2003动物性食品中克伦特罗残留量的测定 GB/T22944-2008 蜂蜜中克伦特罗残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 SN/T 1924-2011 进出口动物源食品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 农业部958号公告-3-2007 动物源食品中莱克多巴胺残留量的测定 高效液相色谱-质谱法 农业部1025号公告－18-2008 动物源性食品中β-受体激动剂残留检测液相色谱－串联质谱法 试剂、耗材与仪器 克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺标准品及其稳定同位素内标 甲醇、乙腈、甲酸、乙酸乙酯、乙酸钠、高氯酸、氢氧化钾、氯化钠、异丙醇-乙酸乙酯、β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶。 PCX混合阳离子交换柱：60mg/3ml、pH试纸：测量范围0.5-5.0和1-14 高效液相色谱-串联质谱联用仪，配电喷雾离子源(ESI)、电子天平、离心机、恒温振荡器、旋转蒸发仪、漩涡混合器、固相萃取仪、水平振荡器、氮吹仪 测定流程（一） 仪器条件(一) 液相色谱条件： 色谱柱：Waters BEH C18， 2.1×100mm， 1.7μm 柱温：40℃ 进样量：5.0μL 流速：0.3 mL/min 0.3%甲酸：乙腈梯度洗脱 仪器条件(二) 质谱条件： 离子源参数：ESI+ 脱溶剂气温度 ： 300 ℃ 脱溶剂气流速： 5 L/min 雾化气压力： 40 psi 鞘气温度： 400 ℃ 鞘气流速： 12 L /min 毛细管电压： 3500 V Nozzle Voltage: 0 V 仪器条件(三) 多反应监测条件 国家加工食品质量监督检验中心（福州） 盐酸克伦特罗 莱克多巴胺 沙丁胺醇 提取： 准确称取2g(精确到0.01g)样品于50 mL具塞离心管中，加入8 mL乙酸钠缓冲液，充分混匀，再加入100μLβ-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶，混匀后，37℃恒温振荡器中水解12h。取出样品冷却至室温，添加适量内标工作液于待测样品中，加盖置于水平振荡器振荡10?min，离心5min（4000r/min）,取4 mL上清液加入高氯酸，混合均与，调节pH至1±0.3。4000r/min离心5min后，将全部上清液转移至具塞离心管，用15%氢氧化钾溶液调节pH至9.8±0.2。加入10mL饱和氯化钠溶液和10mL异丙醇-乙酸乙酯混合溶液，振荡提取10min，在4000r/min下离心5min。转移全部有机相至鸡心瓶中，在40℃下旋转蒸发至近干，加入5mL乙酸钠缓冲液，超声混匀，使残渣充分溶解有备用。 测定流程(二) 净化： 将阳离子交换小柱连接到真空过柱装置，将上述残渣溶液上柱，依次用3mL甲酸水溶液、3mL甲酸甲醇溶液洗涤柱子，并彻底抽干，最后用3mL的5%氨水甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分。流速控制在0.5mL/min。洗脱液在40℃下水浴氮吹至近干，加入定溶液定容至2mL,超声混匀。将溶液转移至1.5mL离心管中，15000r/min离心5min。上清液过0.22μm微孔滤膜后，上机测试。 13 164 9 284 110 302 Ractopamine 6 12 167 90 305 Ractopamine-D3 5 17 148 5 222 110 240 Salbutamol 4 17 151 110 243 Salbutamol-D3 3 13 203 5 259 100 277 Clenbuterol 2 ESI+ 12 204 110 286 Clenbuterol-D9 1 扫描模式 CE (V) 子离子 Fragmentor (V) 母离子 化合物 编号 沙丁胺醇、克伦特罗、莱克多巴胺母离子扫描图 沙丁胺醇子离子扫描图 莱克多巴胺子离子扫描图 克伦特罗子离子扫描图 克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺多反应监测色谱图