微生物限度检查法(1105-1107)标准操作规程.doc

目的：制定检查法。检。 《中国药典》2015年版四部（）第页依据中国药典201年版部微生物法系菌的传代次数不得超过5代表1 试验菌液的制备和使用 试验菌株 试验菌液的制备 计数培养基适用性检查 计数方法适用性试验 需氧菌总数霉菌和酵母菌总数需氧菌总数霉菌和酵母菌总数 金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus CMCC(B) 26003 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基，培养温度30～35℃，培养时间18～24h 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基，培养温度30～35℃，培养时间不超过3天，接种量不大于100cfu。 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基，培养温度30～35℃，培养时间不超过3天，接种量不大于100cfu。 铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa [CMCC(B) 10104] 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis [CMCC(B) 63501] 白色念珠菌Candida albicans [CMCC(F) 98001] 沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基，培养温度20～25℃，培养时间2～3天 胰酪大豆胨琼脂培养基，培养温度30～35℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu。 沙氏葡萄糖琼脂培养基，培养温度20～25℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu。 胰酪大豆胨琼脂培养基，培养温度30～35℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu。 沙氏葡萄糖琼脂培养基，培养温度20～25℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu。 曲霉菌Aspergillus niger [CMCC(F) 98003] 沙氏葡萄糖琼脂培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基，培养温度20～25℃，培养时间5～7天，或直到获得丰富的孢子 供试℃。供试液从制备到加入检验用培养基不得超过1小时。 3.1.2.1.1、水不溶性供试品的制备 取供试品，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲溶液，。pH值至6?8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。 3.1.2.1.3、油脂类供试品取供试品，加入无菌四烷酸异丙酯使溶解，或与最少量并能使供试 品乳化的无菌聚山梨酯80或其他无抑菌性的无菌表面活性剂充分混勻。表面活性剂的温 度一般不超过40℃(特殊情况下，最多不超过45℃)，小心混合，若需要可在水浴中进行，然后加入预热的稀释液使成1 :1 0供试液，保温，混合，并在最短时间内形成乳状液。必 要时 ，用稀释液或含上述表面活性剂的稀释液进一步10倍系列稀释。 3.1.2.1.4、需用特殊方法制备供试液的供试品 3.1.2.1.4.1、膜剂供试品 取供试品，剪碎，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或PH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基，浸泡，振摇，制成1 : 10的供试液。若需要，调节供试液pH值至6—8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。 3.1.2.1.4.2、肠溶及结肠溶制剂供试品取供试品，加入PH 6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠溶 制剂）或PH7. 6无菌磷酸盐缓冲液(用于结肠溶制剂），置45℃水浴中，振摇，使溶解，制成1 :1 0的供试液。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。 3.1.2.1.4. 3、气雾剂、喷雾剂供试品取供试品，置一20℃或其他适宜温度冷冻约1小时，取 出，迅速消毒供试品开启部位，用无菌钢锥在该部位钻一小孔，放至室温，并轻轻转动容 器，使抛射剂缓缓全部释出。供试品亦可采用其他适宜的方法取出。用无菌注射器从每一 容器中吸出药液于无菌容器中混合，然后取样检査。 3.1.2.1.4..4、贴膏剂供试品 取供试品，去掉防粘层，将粘贴面朝上放置在无菌玻璃或塑料 器皿上，在粘贴面上覆盖一层适宜的无菌多孔材料 (如无菌纱布），避免贴膏剂粘贴在一 起。将处理后的贴膏剂放入盛有适宜体积并含有表面活性剂 （如聚山梨酯80或卵磷脂） 稀释液的容器中，振荡至少30分钟。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀 释 。 3.1.2.1.5、内包装膜、袋：取供试品100cm2，剪碎，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，浸泡，振摇，1:10供试液。 3.1.2.2、接种和稀释 按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用供试液。所加菌液的体积应不超过供试液体积的1%。为确认供试品中微生物能被充分检出，应首先选择最低稀释级的供试液进行计数方法适用性试验。 3.1.2.2.1、试验组 取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每1ml供试液所含菌量不大于100cfu。 3.1.2.2.2、供试品对照组 取制备好的供试液，以稀释液代替菌