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hUCMSCs移植对围绝经期大鼠卵巢 储备功能影响的实验研究 中文摘要 【目的】 1．探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)移植对自然衰老围绝经期SD大 鼠(以下简称围绝经期SD大鼠)卵巢储备功能的影响； 2．探讨hUCMSCs移植对围绝经期SD大鼠卵巢组织形态学、细胞超微结构 和细胞凋亡的影响； 3．探讨hUCMSCs移植提高围绝经期SD大鼠卵巢储备功能的可能途径； 4．探讨hUCMSCs移植到围绝经期SD大鼠体内的安全性及可行性。 【方法】 阴道脱落细胞涂片法监测动情周期变化，筛选出30只月龄13～15个月的 SPF级围绝经期SD大鼠模型，随机分为A、B、C组(每组10只)，所有围绝 经期SD大鼠生活条件及喂养方式相同。A组不予处理，B组经尾静脉移植浓度 组相同方法和实验时间移植细胞缓冲液(以下简称PBS液)lml。于成模时，实 7d、14d时各组围绝经期SD大鼠卵巢组织形态学、细胞超微结构的变化和细胞 凋亡情况。 【结果】 1．SD大鼠阴道脱落细胞的变化：连续10天呈现动情周期的紊乱、持续动情 或间期延长等变化，证实入选的SD大鼠为围绝经期模型。 2．实验期间围绝经期SD大鼠一般情况：3组围绝经期SD大鼠精神、饮食、 毛色、活动等情况良好，无出血等明显不良反应，无死亡发生，移植组无明显排 斥反应。 3．围绝经期SD大鼠血清AMH、INHB变化：3组围绝经期SD大鼠成模时 间延长逐渐上升，末次移植后14d时与末次移植后7d时、成模时比较差异有统 组与A、C组围绝经期大鼠的AMH、NHB水平比较，差异有统计学意义(P0．05)： A组和C组比较差异则无统计学意义(胗0．05)。随着实验时间延长，A、C组 围绝经期SD大鼠的AMH、ⅢHB水平逐渐下降，实验时间14d时显著低于成模 体内环境中末次移植后14d时比7d时对AMH、INHB水平产生影响大。因此本 明显提高，可能是围绝经期SD大鼠卵巢储备功能提高了的表现之一。提示 hUCMSCs移植对延缓围绝经期SD大鼠卵巢储备功能下降有积极意义。 4．围绝经期SD大鼠血清性激素变化：3组围绝经期SD大鼠成模时及实验时 期SD大鼠E2、P水平随移植时间延长逐渐上升，末次移植后14d时与末次移植 LH水平随移植时间延长逐渐下降，末次移植后14d时与末次移植后7d时、成模 时比较差异有统计学意义(尸0．05)。实验时间14d时，B组与A组和C组围绝 C组比较差异则无统计学意义(胗0．05)。随着实验时间延长，A、C组围绝经期 SD大鼠E2、P水平逐渐下降，在实验时间14d时显著低于成模时，差异有统计 平逐渐上升，在实验时间14d时显著高于成模时，差异有统计学意义(尸0．05)。 因此本研究推测，hUCMSCs移植一定时间后对围绝经期SD大鼠性激素变化产 生显著影响，可能是围绝经期SD大鼠卵巢储备功能提高了的表现之一。提示 hUCMSCs移植一定时间后能改善围绝经期SD大鼠卵巢储备功能。 5．光镜：HE染色后光镜观察，在实验时间7d，3组围绝经期SD大鼠卵巢 的形态学表现为卵巢间质致密，各期卵泡细胞较少，黄体发育不良且数目较少， 可见较多的闭锁卵泡，多数颗粒细胞消失。实验时间14d时B组与A、C组比较： 光镜下可见卵巢皮质内卵泡形成的状况有所改善，各级卵泡细胞增多；黄体数量 及发育状况与A、C组比较数目增多，闭锁卵泡减少。形态学证实hUCMSCs移 植一定时间后围绝经期SD大鼠卵巢储备功能有所改善。 6．电镜：电镜观察，实验时间7d时，3组围绝经期SD大鼠卵巢组织的卵泡 内可见颗粒细胞内线粒体较少、肿大，空变及髓鞘样变，滑面内质网不丰富，内 质网肿胀扩张，高尔基体肥大。颗粒细胞凋亡，胞质浓缩，线粒体、溶酶体空泡 化等细凋亡小体形成。实验时间14d时与A、C组比较，B组电镜下卵巢卵泡内 可见颗粒细胞多层，呈立方形，颗粒细胞内线粒、滑面内质网较多，结构较前趋 于正常，凋亡小体数目减少。核孔增大，核孔与细胞代谢活性有改善。hUCMSCs 移植后一定时间后，可见卵巢组织细胞内各细胞器形态结构趋于更佳代谢状态。 提示hUCMSCs移植一定时间后卵巢细胞的超微结构有所改善。 7．卵巢组织细胞凋亡情况：免疫荧光染色后观察，实验时间14d时，3组围 绝经期SD大鼠凋亡细胞数比较，A、C组中的凋亡细胞数量明显增多，而且大 部分都是卵泡周边及内部的颗粒细胞。B组卵泡内外凋亡细胞