第三十九章 雨相山上的相见(本篇终章)PPT.ppt

结核病细菌学检验的标准化与新诊断技术进展;强化结核病实验室诊断标准化的必要性;;分类;结核分枝杆菌特点;结核病细菌学检查的重要作用;主要的细菌学检验技术;标准的痰涂片抗酸染色、镜检技术;痰标本的采集、保存和运送;标本的采集 ;如何正确留痰;直接痰涂片检查法 ;细菌学常规检查 —直接涂片法;载玻片;染色;（一）为防止抗酸杆菌的交叉污染，严禁油镜头直接接触玻片上的痰膜。 （二）仔细观察300以上的视野。 （三）每个工作日，一名镜检人员的玻片阅读量一般不应超过25张。 （四）连续阅读10～12张玻片后，应休息20分钟左右。 ;;;细菌学常规检查 —直接涂片法;细菌学常规检查 —直接涂片法;细菌学常规检查 —直接涂片法;细菌学常规检查 —直接涂片法;涂片镜检质量保证系统 —室内质控;涂片镜检质量保证系统—室间质控;复检玻片样本量;复检样本量计算表;复检样本量计算表说明： ;复检结果评价;1.误差分类：分为定性误差和定量误差 （1）定性误差包括高假阳性和高假阴性 高假阳性（High False Positive HFP）：阴性片被错误地判读为2＋以上的阳性。 高假阴性（High False Negative HFN）：2＋以上的阳性玻片被错误地判读为阴性。;（2）定量误差包括量化误差、低假阳性和低假阴性 量化误差（Quantification Error ，QE）：同一张阳性玻片初检者和复检者阳性判断级别的差异。 低假阳性（Low False Positive ，LFP）：阴性玻片被错误地判断为1＋及以下的阳性。 低假阴性（Low False Negative， LFN）：1＋及以下玻片被错误地判断为阴性。;常见“误差”原因;实验室诊断的新进展;1、现代分子生物学检测主要技术;（1.1）聚合酶链反应（PCR）;实时荧光定量PCR;实时荧光定量PCR;（1.2）环介导等温扩增基因检测 ( Loop mediated isothermal amplification， LAMP);Purification for Ultra Rapid Extraction (PURE);LAMP 检测;LAMP 敏感度;LAMP结果分析;（1.3）、分子线性探针（Hain 技术）; GenoType? 分支杆菌试剂盒系列;技术设备;自动操作-全自动杂交仪;GenoType? MTBDRplus结果; 适用于培养物和痰液。 检测快速，对于直接采集的样本或阳性培养物在数小时后内即可完成检测； 检测INH单耐药型TB、MDR和XDR； 符合WHO推荐的线性探针分析标准。;验证数据;结论;（1.4）、基因芯片技术;什么是基因芯片;基因芯片技术的主要特点;博奥 分枝杆菌菌种鉴定试剂盒(DNA微阵列芯片法);芯片扫描结果 1; 临床验证;（1.5）GeneXpert MTB/RIF快速诊断技术;GeneXpert 最大程度简化TB检测！！！;Xpert MTB/RIF检测操作步骤;“Sample in. Answer out.”;研究人数 1,700 Patients ? 秘鲁、南非、阿塞拜疆、印度;结论;现代免疫学诊断技术;体液免疫学诊断技术的意义;2、细胞免疫学诊断技术;酶联免疫斑点(ELISpot)技术 是检测细胞分泌细胞因子的一种实验方法，采用可定量的夹心ELISA方法，利用结核分枝杆菌特异性抗原ESAT-6 CFP-10刺激和激活免疫活性细胞使其产生IFN-?，并检测IFN-?的浓度变化进行诊断的方法。通过ELISpot酶联斑点分析系统对加底物后形成的斑点分析后得出结果。ELISpot具有较高的特异性和敏感性。;ELISPOT技术原理;ELISPOT在结核病诊断中的应用; ELISPOT早期技术评估 英国Ewer等用ELISpot检测对结核分枝杆菌分泌的抗原有特异性反应的T淋巴细胞来诊断早期结核病。这项研究共纳入了结核流行区有不同程度结核病接触史的535名学生，结果显示结核菌素皮肤试验(TST)和ELISpot的一致性达89%(P0.0001)。但ELISpot与研究对象结核病接触程度之间的正相关性显著强于TST。在接种过BCG的儿童中，TST假阳性的可能性较大，而BCG接种对ELISpot结果没有影响。作者认为ELISpot可开始替代TST，这将使更多的人能在感染仍处于隐匿期时就可进行预防，而不至于发展成为