第十七章病毒检验技术PPT.pptVIP

《微生物学检验》 国家卫生和计划生育委员会规划教材 国家卫生和计划生育委员会规划教材 微生物学检验 第十七章病毒检验技术 返回总目录 本 章 内 容 第一节 标本的采集、处理与运送 1 第二节 病毒的分离与鉴定 2 第三节 病毒学检测及诊断 3 学习目标及重点 学习目标： 掌握病毒标本采集和送检应遵循的原则；病毒检验鉴定常用技术 熟悉病毒血清学诊断常用的方法 了解病毒感染的实验室快速诊断 学会病毒的培养基本操作 本章重点： ★病毒标本采集和运送原则。 ★病毒学诊断及鉴定常用方法。 ★病毒培养的基本操作。 第一节 标本的采集、处理与运送 一、标本的采集与处理 1. 采集时间：发病早期或急性期尽快采集。 2.采集部位：取决于临床症状和所怀疑感染的病毒。 如：流感病毒感染------鼻咽拭子 乙型脑炎病毒感染------脑脊液 轮状病毒感染------粪便 乙型肝炎病毒感染------血液 3.采集方法与处理 提高病毒的分离率，防止标本污染。 采集时无菌操作,可加入抗生素以杀死杂菌 一、 病毒的分离培养 2.鸡胚培养 第二节 病毒的分离与鉴定 原代细胞培养 二倍体细胞培养 传代细胞 羊膜腔接种 尿囊腔接种 卵黄囊接种 绒毛尿囊膜接种 组织细胞培养 鸡胚培养 动物接种 1.组织细胞培养 鸡成纤维细胞 Hep-2细胞 细胞培养瓶 Vero细胞 第二节 病毒的分离与鉴定 * 一般选用9～14d的鸡胚 来源充足、 组织分化程度低、 本身很少携带病毒和细菌、 对接种病毒不产生抗体及 病毒较易增殖等 2.鸡胚培养 优点： 第二节 病毒的分离与鉴定 选择不同的接种部位是病毒分离成功的关键 常用的主要有： 尿囊腔接种、羊膜腔接种、卵黄囊接种、绒毛尿囊膜接种 2.鸡胚培养 第二节 病毒的分离与鉴定 2.鸡胚培养 尿囊腔接种 羊膜腔接种 尿 囊 腔 羊 膜 腔 常用接种途径： 尿囊腔接种、羊膜腔接种、卵黄囊接种、绒毛尿囊膜接种 常用于流感病毒、流行性腮腺炎病毒 和新城疫病毒的适应和传代培养 常用于临床流感病毒初次分离 第二节 病毒的分离与鉴定 卵黄囊接种 绒毛尿囊膜接种 卵 黄 囊 绒毛尿囊膜 人工气室 羊膜腔 气室 绒毛尿囊膜 尿囊腔 卵白 2.鸡胚培养 主要用于虫媒病毒、衣原体及立克次体的分离和繁殖。 常用于牛痘病毒、天花病毒、单纯疱疹病毒的分离 卵 黄 囊 第二节 病毒的分离与鉴定 3.动物接种 常用的实验动物有小白鼠、乳鼠、豚鼠、家兔、猴和鸡等 常用的接种途径包括皮下、皮内、腹腔、静脉、角膜、鼻腔及脑内接种等方式 第二节 病毒的分离与鉴定 二、病毒增殖的观察 （一）病毒在细胞内增殖的鉴定指标 1．细胞形态的改变 2．红细胞吸附 3．细胞培养液pH值改变 （二）病毒数量及病毒感染性测定 1．血凝试验 2．中和试验 3．空斑形成试验 4．半数感染量（ID50）和组织培养半数感染量（TCID50） 第二节 病毒的分离与鉴定 二、病毒增殖的观察 （一）病毒在细胞内增殖的鉴定指标 1．细胞形态的改变 （1） 细胞病变效应（cytophathic effect，CPE） 第二节 病毒的分离与鉴定 正常细胞 病变细胞 是指某些病毒特别是无包膜的病毒感染组织细胞后，正常生长的梭形细胞变圆、变性、坏死、溶解及从培养瓶壁脱落，细胞堆积形成葡萄状 第二节 病毒的分离与鉴定 （2）多核巨细胞 1．细胞形态的改变 多见于有包膜的病毒，如呼吸道合胞病毒、麻疹病毒等，由感染细胞融合而成多核巨细胞 第二节 病毒的分离与鉴定 （3）包涵体 1．细胞形态的改变 某些病毒感染宿主细胞后，细胞内出现一种光学显微镜下可见的蛋白质结构，多为圆形、卵圆形或不定形。一般是由完整的病毒颗粒或尚未装配的病毒亚基聚集而成，称为包涵体。 第二节 病毒的分离与鉴定 2．红细胞吸附 3．细胞培养液pH值改变 二、病毒增殖的观察 病毒感染细胞后，可使细胞的代谢发生变化，导致培养液pH值改变。 第二节 病毒的分离与鉴定 （二）病毒数量及病毒感染性测定 二、病毒增殖的观察 1．血凝试验 病毒颗粒 红细胞 某些病毒（如流感病毒）表面的血凝素（HA）能引起人或某些哺乳动物的红细胞发生凝集，将这类病毒感染细胞后收集的病毒液作不同稀释，以发生血凝反应的病毒液的最高稀释度作为该病毒的血凝效价（即滴度），可对病毒含量进行半定量测定。 血凝现象 第二节 病毒的分离