蛋白质的变性沉淀反应一.pptVIP

一、实验目的 （1）加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。 （2）了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。 （3）了解蛋白质变性与沉淀的关系。 二、实验原理 在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。蛋白质的沉淀反应可分为两类。 （1）可逆的沉淀的反应 此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性。如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。提纯蛋白质时，常利用此类反应。 （2）不可逆沉淀反应 此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。加热引起的蛋白质沉淀与凝固，蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类。 蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析出。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。 三、仪器、材料和试剂 实验材料和试剂 　　　　0.2%鸡蛋清溶液；pH4.7 醋酸-醋酸钠的缓冲溶液；3%硝酸银溶液；5%三氯乙酸溶液；95%乙醇；饱和硫酸铵溶液；硫酸铵结晶粉末；0.1 mol·L-1盐酸溶液；0.1 mol·L-1氢氧化钠溶液；0.05 mol·L-1碳酸钠溶液；0.1 mol·L-1醋酸溶液；甲基红溶液；2%氯化钡溶液；10%NaOH；饱和的NaCl；10%醋酸。 四、操作步骤与方法 4．加热沉淀蛋白质：取5支试管，编号。依下表顺序加入试剂： 将各管混匀，观察记录各管情况，然后，放沸水浴中加热10min，注意观察各管的沉淀情况，最后将第3、4、5号管分别用10%NaOH或10%醋酸中和，观察并解释实验结果。 5．乙醇引起的变性与沉淀：取3支试管，编号。依下表顺序加入试剂： 振摇混匀后，观察各管有何变化。放置片刻，向各管内加水8 ml，然后在第2、3号管中各加一滴甲基红，再分别用0.1 mol·L-1醋酸溶液及0.05 mol·L-1碳酸钠溶液中和之。观察各管颜色的变化和沉淀的生成。每管再加0.1 mol·L-1盐酸溶液数滴，观察沉淀的再溶解。解释各管发生的全部现象。 五、思考题： 1. 鸡蛋清为何可做铅、汞中毒的解素剂？ 2．氯化汞为何能做为杀菌剂？ * * 蛋白质的变性、沉淀反应 1．盐析：加5%卵清蛋白溶液5 ml于试管中，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。倒出少量混浊沉淀，加少量水，观察是否溶解，为什么？将管中内容物过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止，此时析出的沉淀为清蛋白。 取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，观察沉淀的再溶解。 2．重金属离子沉淀蛋白质：重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。 取1支试管，加入蛋白质溶液2 ml，再加3%硝酸银溶液1~2滴，振荡试管，有沉淀产生。放置片刻，倾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？为什么？ 3．某些有机酸沉淀蛋白质：取1支试管，加入蛋白质溶液2 ml，再加1 ml5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察沉淀的生成。放置片刻，倾出上清液，向沉淀中加入少量水，观察沉淀是否溶解。 5 2 - - - 10 5 - - 2 5 - 10 4 5 - - 5 - 10 3 5 - - - 5 10 2 7 - - - - 10 1 蒸馏水（滴） 10% NaOH (滴） 饱和的NaCl（滴） 10%醋酸 （滴） 0.1mol/L醋酸（滴） 蛋清蛋白质（滴） 试剂 管号 1 — — 1 1 1 — — 1 — 1 — 1 1 1 1 2 3 pH4.7 缓冲溶液 95%乙醇 0.1 mol·L-1 盐酸溶液 0.1 mol·L-1 氢氧化钠 溶 液 5%卵清 蛋白溶液 试剂（ml） 管号