实验三 免疫标记技术.ppt

* * 实验三 免疫标记技术 Immunolabelling Technique 实验内容 1.ELISA(双抗体夹心法)检测HBsAg 2.录像：免疫标记技术 免疫标记技术 = 抗原抗体反应 示踪物标记 灵敏性 特异性 免疫标记技术的主要特点： 高度特异性、高度灵敏性 免疫技术 + 标记技术 酶 荧光素 同位素 免疫标记技术 放射物标记技术 酶标记技术 免疫荧光技术 其他标记技术 酶联免疫吸附技术 酶免疫组化技术 双抗体夹心法 竞 争 法 双抗原夹心法 间 接 法 双位一点法 酶免疫技术 利用酶催化底物反应的生物放大效应,提高特异性抗原-抗体反应检测敏感性的一种免疫标记技术。 Ag + AbE AgAbE + 底物 呈色反应 基本原理 EIA 固相 聚苯乙烯 Ag或Ab吸附到固相上的过程,称为包被 (酶免疫测定法) 酶免疫技术的基本特点： ①标记后保留酶和抗原(抗体)的活性； ②酶促反应的专一性，保证了特异性； ③底物反应的放大作用，提高了敏感性； ④酶标试剂保存稳定； ⑤操作简便，安全易行。 常用酶及其底物 1.辣根过氧化物酶(HRP) 常用底物： (1)邻苯二胺(OPD)：反应显橙黄色，应避光，致癌性。 (2)四甲基联苯胺(TMB)：反应后呈蓝色，无需避光，无致癌性, 但水溶性差。 2.碱性磷酸酶(AP) 常用底物 对硝基苯磷酸酯(p-NPP)：产物为黄色。 AP灵敏性高与HRP，但不易获得纯品，稳定性较HRP差，且价高，故应用不如HRP普及。 酶联免疫吸附实验 enzyme linked immunosorbent assay （ ELISA ） 实验目的 1.掌握酶联免疫吸附实验的基本原理； 2.熟悉利用双抗体夹心法测定HBsAg。 ELISA(双抗体夹心法)检测HBsAg原理示意 HBV感染后的血清学指标: HBsAg, HBsAb HBeAg, HBeAb HBcAb(IgG,IgM) 乙肝表面抗原，存在于HBV感染者的血清中,为感染指标之一。 *