[生物学]基因工程.ppt

各种载体所能容纳的外源片段的大小 质粒载体：5kb λ噬菌体载体：22kb 粘粒（cos质粒，柯斯质粒）：40-50kb 酵母人工染色体载体（YAC）：200-300kb 酶切筛选 序列分析 DNA模板变性 与体内DNA解链过程不同，PCR中作为模板的双链DNA是通过94℃左右的高温使其发生变性，形成单链DNA 模板与引物退火 PCR通常需要两条寡核苷酸链作为DNA合成时的引物（primer）,通过控制退火温度，引物就能准确地与扩增区域的两端配对。 primers 引物 引物延伸 在PCR反应体系中的DNA聚合酶，能够催化反应体系中游离的单核苷酸（dNTPs）由引物5→3方向，按碱基配对的原则延伸，形成两条与模板DNA互补的复制链。 Taq 酶 dNTPS 新合成的链又可作为下轮循环反应的模板。 热变性-退火-延伸的过程就是一个PCR循环， 每一循环后的模板均比前一循环增加1倍。理论上讲，经n次循环后，扩增的DNA产 物为2n拷贝。 热变性-复性-延伸 25-35 次循环 百万倍扩增 5? Prime 1 5? Prime 2 Cycle 2 Cycle 1 5? 5? 5? 5? 5? 5? Template DNA 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 基本工作原理 Cycle 3 5? 5? 5? 5