[中学教育]1生化科技学系微生物学组专题讨.pdfVIP

生化科技學系微生物學組專題討論 題目 : Pivotal Role of the Cyclin-dependent Kinase Inhibitor p21WAF1/CIP1 in Apoptosis and Autophagy. 作者：Keishi Fujiwara, Shigeru Daido, Akitsugu Yamamoto, Ryuji Kobayashi, Tomohisa Yokoyama, Hiroshi Aoki, Eiji Iwado, Naoki Shinojima, Yasuko Kondo, and Seiji Kondo 文章來源：The Journal of Biological Chemistry 283: 388-397, 2008. 演講人：Ya-Fei Li 李亞菲 B93B02002 指導老師：Ching-Tsan Huang, PhD 黃慶璨 博士 演講日期：March 25th, 2008 演講地點：The 6th classroom 摘要 正常的細胞發展過程中，許多細胞最後會走上非病因性的死亡，此種情況被 稱作計畫性細胞死亡 (programmed cell death, PCD) ，與許多生理現象有關，並有 益於細胞回收再利用資源；但當其失去控制時，則和癌症或特殊疾病的發生有密 切的關係。而PCD依其形態與生化性質上的差異，可分為細胞凋亡 (apoptosis) 與細胞自嗜(autophagy) ，兩者都有研究顯示與疾病的產生有所關聯。越來越多證 據顯示，細胞凋亡與細胞自嗜間有相互交流(cross-talk)的情況，但對於詳細的分 子機制卻仍存在許多未解的問題。本研究主要目的在探討p21WAF1/CIP1 此一分 子，在此兩種PCD 途徑的交流中所扮演的角色。已有研究顯示 p21可以正或負 調控細胞凋亡，但和細胞自嗜的關聯性卻不清楚。作者使用 p21+/+ 和 p21-/-的 老鼠胚胎纖維母細胞(mouse embryonic fibroblast, MEF)為研究對象，並以 C2-ceramide作處理，對此兩種細胞所引發的細胞凋亡或自嗜以探討 p21的影響。 在確定 C2-ceramide 對細胞生存率的影響後，藉由分析細胞週期、DNA染色與酸 性囊狀胞器定量(Quantification of acidic vesicular organelles) ，發現C2-ceramide在 p21+/+和 p21-/-的細胞種類中分別會引發細胞凋亡與細胞自嗜；為了進一步確定 p21在 PCD中的影響，作者分別利用 siRNA 與外生表現(exogenous expression) 的技術去抑制和大量表現於 p21+/+與p21-/-的細胞，並藉由觀察 GFP-LC3的小 點狀分布，發現 p21的減少會導致自嗜作用的增加，反之則造成凋亡作用的提 升。接著作者更進一步比較，抑制與過量表現細胞自嗜相關蛋白質 (autophagy-related, Atg) Beclin 1 與Atg5 ，證實兩者也參與了C2-ceramide引起的 PCD 。最後再以γ射線處理細胞，確定以上實驗結果並不僅限於 C2-ceramide引 起的 PCD 。綜合以上，作者認為p21會正向調控細胞凋 亡而負向調控自嗜途徑， 對於決定細胞走向何種途徑扮演了重要的腳色。 Keywords ：PCD, apoptosis, autophagy, p21, C2-ceramide 1 前言 本研究之重要性 PCD是正常生長狀況下，細胞週期的最終過程，其中至少包括了細胞凋亡 與細胞自嗜兩種途徑。而細胞的死亡由近年來的研究顯示，和癌症及特定疾病 的發生有很大的關聯，如癌細胞的滋長可能肇因於不受控制的 PCD ，又如神經 退化疾病起因於過盛的自嗜作用(1) ；因此，若能了解PCD的詳細分子機制， 相信對於治療上的應用會有相當大的助益，因而相關研究也越來越受重視。 前人做過的研究 細胞凋亡與細胞自嗜在正常生理狀態都存在，但不受控制的狀況下就可能 引起疾