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北京安科博瑞科技有限公司 ANKE-T-06 利用DAISY II 体外模拟培养法测定真消化率 A. 试剂 a) 缓冲溶液A ：g/L KH2PO4 10.0 MgSO4•7H2O 0.5 NaCl 0.5 CaCl2•2H2O 0.1 尿素(试剂级) 0.5 b) 缓冲溶液B：g/L Na2CO3 15.0 Na2S•9H2O 1.0 c) 瘤胃液接种物。 d) 30 g/L十二烷基硫酸钠（中性洗涤剂）溶液。 称取18.61 g乙二胺四乙酸二钠(Na EDTA, 2 化学纯)和6.81g 四硼酸钠(Na B O ·10H O) 同放入1 000 mL烧杯中,加少量水加热溶解后,再加 2 4 7 2 入30 g十二烷基硫酸钠和10 mL乙二醇乙醚。称取4.65 g无水磷酸氢二钠，置于另一烧杯中， 加少量水，微微加热溶解后倾于第一个烧杯中，稀释至1 000 mL。此溶液p Ｈ在6.9~7.0左右 （一般不需调整）。 (c) 无水亚硫酸钠（Na SO ）。 2 3 (d) 丙酮：无色，并且蒸发后无残渣。 B.设备 a) DAISYII 体外模拟培养箱 b) 过滤装置- ANKOM F57滤袋 c) 封口机 d) 量筒– 1 L 500 mL e) 热水瓶–2个 f) 过滤用奶酪布 g) ANKOM 220 纤维素分析仪 生效日期：2009-01-01 第 1 页 共 3 页 北京安科博瑞科技有限公司 ANKE-T-06 C. 步骤 a) 滤袋和样品准备 1)将F57 滤袋在丙酮中浸泡3-5 min，然后放在通风橱中自然干燥。用丙酮浸泡的目的是 除掉表面剂，否则会影响微生物消化。对每个F57 滤袋称重，记录质量(m1)。 将天平归零， 并向滤袋中直接称取0.25 g 样品 (m) 注：进行48 h消化研究时，样品量也可以为0.5 g 。然而，最近研究表明样品量为0.25 g 时测定结果更准确。 2) 将每个滤袋封口，并防入Daisy II 体外模拟培养箱 消化罐中 (每个罐中最多可以放 25 样品)。 样品应平衡分布在消化罐分隔的两边。同时至少包括一个空白滤袋，用于确定 测定结果校正因子(C1)。 b) 混合缓冲溶液准备(每个消化罐) 1) 将缓冲溶液A和B进行预热(39°C)。在容器中先加缓冲溶液A1330 ml ，然后向其中加 266 ml缓冲溶液B （比例为1:5)。 缓冲溶液A和B的用量要准确，以确保39°C混合溶液的pH 为6.8 。向每个装有样品滤袋的消化罐中加1600 ml 混合缓冲溶液。 2) 将装有样品和缓冲溶液的消化罐放入Daisy II 体外模拟培养箱，打开加热和搅拌(红 色开关为电源)。让消化罐温度平衡至少20-30 min 。同时收集准备瘤胃接种物。 c) 接种物准备与培养 所有的玻璃器皿要保持在 39°C 。 1) 向2个热水瓶中加入39° C 水对其进行预热。在收集瘤胃液前将热水倒掉。采用适宜的 采集步骤，取至少2000 ml 瘤胃液，放入热水瓶中。 2) 将瘤胃液从热水瓶中倒出，放到混合器中。向混合器的容器中冲入CO2 气体并快速 混合30 。混合的目的是防止微生物黏附，确保用于体外消化微生物代表性。将混合好的瘤 胃液用4层奶酪布过滤到5升容量瓶中(预热39° C)。 用四层新的奶酪布过滤将其他热水瓶中的瘤胃液过滤到同一个5升容量瓶中。容量瓶要持 续充CO2。 3) 用量筒量取400 ml 瘤胃培养物。从Daisy