[农学]chap5 ploidy creact细胞工程.ppt

第一节 花药及花粉培养 第一节 花药及花粉培养 花药培养与小孢子培养的目的是为了获得单倍体(具有性细胞染色体数的植株）。 Tetraploid植物haploid为dihaploid 马铃薯 2n = 4x = 48 n = 2x = 24 hexaploid植物其haploid为triploid 普通小麦 2n = 6x = 42 n = 3x = 21 octoploid植物其haploid为tetraploid 草 莓 2n = 8x = 56 n = 4x = 28 第一节 花药及花粉培养 二. 花 药 培 养 首先报道通过花药培养获得单倍体植株成功的是印度学者Guha和Maheshwari (1964, 1966)。现已有近300种植物花药培养成功。 目前，花药培养获得单倍体的技术途径已在禾本科作物、茄科作物、十字花科作物的育种中广泛应用。 我国通过花药培养途径曾培育出大面积推广应用的水稻品种“寒花早”、“中花8号”等，小麦品种“京花1号”。同时还获得一大批具有育种价值的单倍体系。 第一节 花药及花粉培养 花粉的发育时期 四分体 — 小孢子 — 单核花粉 — 双核花粉 最适期 第一节 花药及花粉培养 烟草花粉在正常的活体内发育期间，单核小孢子在第一次有丝分裂之后,与r-RNA合成有关的基因会关闭约24小时。据研究，这一时期是花粉发育终端分化的临界期。 涉及到具体的植物，花药培养的取材时期并不绝对相同，如番茄以减数分裂期的幼嫩花药为好，而云苔属植物的某些材料则以成熟花粉为好。这可能是由于不同植物的花粉终端分化临界期不同的缘故。 第一节 花药及花粉培养 Sunderland (1971)对烟草不同花粉发育时期的培养反应进行了观察： 花粉发育时期 胚状体诱导频率(％) 减数分裂期 0 单核早期 14 单核晚期 40 双核早期 55 预 处 理 大量试验结果表明，花药培养前给予一定的低温处理是十分必要的。 烟草、茄子 3～5℃ 72小时 水稻 10℃ 10～14天 柑橘 3℃ 5～10天 马铃薯 4℃ 48小时 第一节 花药及花粉培养 低温处理的作用： 可以激发花粉母细胞产生两个相等核，而不是一个营养核一个生殖核； 保持高比例的强生活力花粉，同时延缓体细胞组织的衰老； 激发花粉产生原胚； 促使细胞同步分裂。 培养基 花药培养常用的基本培养基：MS（Murashigc Skoog，1962）； Nitsch(Nitsch，1969)；N6(朱至清，1974)；B5(Gamborg et al.，1976)。 附加成分：蔗糖, 激素。 蔗糖：提供C源；维持适宜的渗透压；抑制花药壁的分裂而促进花粉细胞分裂。 激素： 细胞分裂素类： BA— 6-benzyladenin KT— kinetin Zeatin 生长素类： NAA— naphthalene acetic acid I A A— indole-3-acetic acid 2,4-D— 2,4-dichlorophenoxyacetic acid 高秀云等对茄子的研究表明： MS＋2,4-D 0.5mgl-1＋KT 1mgl-1 n 93.8% 2n 6.2% MS＋2,4-D 2.0mgl-1＋KT 1mgl-1 n 64,1% 2n 35.9% 培养初期花粉发育的途径 花药培养中单倍体形成的途径 三. 花粉及小孢子培养方法 1．取材时期的确定 ? 四分体—单核早期—单核晚期—双核早期—双核晚期—三核期 ------------------- --------------------------------------- 小 孢 子 花 粉 粒 ---------------- ------------------