酶的活性调节.ppt

1．结合部位 Binding site 酶分子中与底物结合的部位。决定酶的专一性. （二）E 的活性中心特点 1 几个氨基酸残基，1％?2 ％酶分子体积 2 三维实体 3 表面或接近表面 裂缝(crevice) 疏水区域 4 柔性或可运动性 E 诱导契合和 S底物的形变 5 ES 是由次级键形成 1 酶分子侧链基团的化学修饰法 修饰剂（非特异性、特异性，如DFP 、亲和标记试剂） ? 与酶共价结合使酶活性降低或丧失 ? 酶蛋白水解 ? 分离含标记片段 ? 确定aa序列和被标记aa的位置 2 动力学参数测定法：测催化反应速度、Km、Vmax 、Ki等 3 空间结构研究方法： X-射线衍射、核磁共振、CD光谱 4 定点诱变(site-directed mutagenesis)法： 通过基因突变，了解酶蛋白的结构变化 酶与底物结合成中间络合物，使分子间的反应转变为分子内反应。底物分子从稀溶液中密集到活性中心区，并使活性中心的催化基团与底物的反应基团之间正确定向排列所产生的效应。 酶与底物形成复合物之后,底物分子集中于酶的活性中心，大大提高这个区域底物的有效浓度，从而加速酶促反应速度。 酶分子中可以作为广义酸、碱的基团 广义酸基团 　　广义碱基团　　（质子供体） 　　（质子受体） 　５、金属离子催化 金属酶；金属激活酶。 通过结合底物为反应定向；调节氧化还原反应；电荷屏蔽。 　６、多元催化协同作用 　７、微环境的影响 酶的活性中心是低介电区域,这一疏水的微环境大大有利于底物与酶反应。 (一).溶 菌 酶 （lysozyme) 溶菌酶存在于鸡蛋清和动物的眼泪中，其生物学功能是催化某些细菌细胞壁的多糖水解，从而溶解细菌的细胞壁。 溶菌酶是第一个用X-射线法阐明其全部结构和功能的酶。是1922年伦敦细菌学家弗莱明(Fleming)首次发现的。 1.底物、溶菌酶及酶和底物复合物的结构 溶菌酶的底物 溶菌酶通过水解某些细菌细胞壁的多糖组份来溶解细胞壁，细胞壁的多糖由两种糖组成: N-乙酰氨基葡萄糖 (NAG) N-乙酰氨基葡萄糖乳酸(NAM) 溶菌酶的最适小分子底物 溶菌酶的结构 溶菌酶由129个氨基酸残基构成，是一个单链蛋白，分子内含有四对二硫键。活性中心的氨基酸残基是Glu35和Asp52 。 溶菌酶和底物结合的空间构象 从表面构象看，酶的结构不很紧密，大多数极性氨基酸残基分布在分子的表面，非极性氨基酸残基分布在分子的内部。整个酶分子中有一狭长的凹穴。最适底物正好与酶分子的凹穴相结合，凹穴中的Glu35和Asp52 是活性中心的氨基酸残基。 溶菌酶催化反应机理 RNase活性中心的酸硷催化机理 核糖核酸链受Rnase水解的位点 RNase-底物复合物 羧肽酶活性中心Zn2+的作用 羧肽酶活性中心的共价催化机理 胰凝乳蛋白酶催化机制的特点 定向效应 广义的酸碱催化 共价催化 酶的别构（变构）效应示意图 实例：消化系统蛋白酶原的激活 胰蛋白酶对各种胰脏蛋白酶的激活作用 （三）、酶的共价修饰 级联系统调控糖原分解示意图 同工酶在各学科中的应用 第七步 Ser195作为质子的受体从His57接受质子 第八步 底物C-N键碳端产物释放、酶恢复原状。 407 ： 五 酶活性的调节控制 （一）别构调控(allosteric regulation)， 酶的别构调节:酶分子的非催化部位与某些化合物可逆地非共价结合后导致酶分子发生构象改变，进而改变酶的活性状态，称为酶的别构调节 别构酶:具有别构调节作用的酶。 效应物:凡能使酶分子发生别构作用的物质称为效应物，通常为小分子代谢物或辅因子。如因别构导致酶活性增加的物质称为正效应物或别构激活剂，反之称负效应物或别构抑制剂。 1.概念： 413 同促效应（同种协同效应）：它的调节物分子就是底物分子，这种酶分子上有两个以上的底物结合中心，其调节作用取决于酶是有多少个底物结合中心被占据。 异促效应：这种别构酶除了与底物分子作用外，还可与其他的调节物分子结合，它的调节物分子不是底物分子。 多数别构酶兼有同促效应和异促效应。 效应剂 别构中心 活性中心 别构酶的调控机理 2.别构酶的基本特点： （1）由多个亚基组成的寡聚酶 （2）具有四级结构 （3）除了有可以结合底物的酶的活性中心外，还有可以结合调节物的别构中心（有时也称调节中心）。这两个中心可能位于同一