优化和执行蛋白质聚集体研究的完整工作流程-Agilent.PDF

优化和执行蛋白质聚集体研究的完 整工作流程 将体积排阻色谱与方法开发和光散射相结合 应用简报 生物治疗药物和生物仿制药 作者 摘要 Andy Coffey 和 Matthew Rain 本应用简报介绍了一套完整的聚集体分析工作流程，它能够： 安捷伦科技公司 • 优化单克隆抗体高性能体积排阻色谱 (SEC) 的流动相条件 • 表征包括单体、二聚体和高阶聚集体等物质的聚集特征 我们使用安捷伦缓冲液顾问软件自动进行复杂的 SEC 优化实验，实验中充分 利用 Agilent 1260 Infinity II 生物惰性液相色谱系统的功能，在一系列快速液 相色谱运行中对各种缓冲液组分进行自动实时混合。Agilent 1260 Infinity Bio- MDS 多检测器套装提供了动态光散射检测功能，能够检测高阶蛋白质聚集 体、测定绝对分子量并扩大紫外检测系统的测量范围。 前言 本应用简报展示了一套用于聚集体研究 仪器 的完整工作流程解决方案，其能够： 一些单克隆抗体 (mAb) 和蛋白质在溶 用于聚集体分析的 Agilent 1260 Infinity 液中容易自发聚集。在许多生物制药 • 从四种简单的储备液中自动混 II 生物惰性液相色谱系统包括： 应用中，必须在各种条件下精确地表 合指定列表中的液相色谱缓冲 • Agilent 1260 Infinity II 生物惰性 征和定量此类聚集的程度。体积排阻 液，并使用安捷伦缓冲液顾问 四元泵 (G5654A) 色谱 (SEC) 是一种表征和定量蛋白质 软件和高分离度生物惰性四元 聚集体的强大技术，但是准确测量需 液相色谱泵实时调节 pH 和缓冲 • 配备样品冷却器和多重清洗功 要在适合天然蛋白质确证的条件下具 液浓度 能的 Agilent 1260 Infinity II 生物 有优异的色谱性能。为通过改善特定 惰性 Multisampler (G5668A) 蛋白质的色谱峰形提高其分离度，通 • 利用动态光散射检测技术测量 常需要评估各种不同的流动相条件。 高阶蛋白质聚集体，补充紫外 • 配备生物惰性热交换器的 检测以将高灵敏度扩展至宽质 Agilent 1260 Infinity II 多柱恒温箱 采用 SEC 技术时有时会忽略对缓冲 量范围 (G7116A) 液条件的优化。过去，通过优化缓冲 液条件克服与固定相材料之间不必要 • 利用光散射检测表征聚集蛋白 • 配备生物惰性标准流通池的 的非特异性相互作用，但对色谱柱缺 质和单体蛋白质的绝对分子量 Ag