双向凝胶电泳技术及其应用-生物技术通报-中国农业科学院.PDFVIP

生物技术通报 年第 期 ·技术与方法· BIOTECHNOLOG Y BULLETIN 2009 1 双向凝胶电泳技术及其应用 冯海燕 景志忠 房永祥 莫斯科 （中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 甘肃省动物寄生虫病重点实验室，兰州 730046） 摘 要： 介绍了双向电泳的基本原理、操作过程及其在动植物和医学中的应用。 同时对当前双向电泳技术面临的 挑战和发展前景进行了介绍。 关键词： 双向电泳 操作程序 应用 Two-dimensional Electrophoresis and Its Application Feng Haiyan Jing Zhizhong Fang Yongxiang Mo Sike （Key Laboratory of Veterinary Parasitology of Gansu Province ，State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology ， Lanzhou Veterinary Research Institute ，CAAS ，Lanzhou 730046） ： ， Abstract This article introduced the technical principle process of two-dimensional electrophoresis and research ， application involved in animal botany and medicine industry. Key words ： Two-dimensional electrophoresis Operation procedure Application 1 双向电泳的基本原理及操作程序 避免脂类、核酸、盐等物质的干扰作用；（4 ）蛋白质 1.1 基本原理 样品与第一向电泳的相容性。 1975 年，意大利生化学家OFarrell 发明了双向 对于组织细胞，首先需将其破碎，尽可能地将 [1] 蛋白质组分溶解在缓冲液中，以便在适当的电泳条 电泳技术 。 它是利用蛋白质的带电性和分子量大 小的差异，通过两次凝胶电泳达到分离蛋白质组的 件下分离。 组织细胞破碎的方法包括低渗、匀浆、超 技术。 第一向电泳依据蛋白质的等电点不同，通过 声、反复冻融等。而对于体液成分，如血清、腹水、尿 等电聚焦将带不同净电荷的蛋白质进行分离。 在此 液等，仅需经过稀释、加热变性、溶解于适当缓冲液 基础上， 依据蛋白质分子量的不同进行第二向的 便可用于双向电泳。 植物组织（特别是绿色叶片） 中 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳，将其分离。 双向电泳技 含有色素、酚及其它多种次生代谢产物，会干扰电 术包括蛋白样品制备、等电聚焦、在平衡液中平衡 泳及分辨效果。 因此，在植物蛋白质制备过程中常 胶条和 SDS电泳等步骤。 先采用冷丙酮及三氯乙酸沉淀蛋白质，不仅有