[医学]第三章 2010年紫外可见光谱第三次.pptVIP

第三节 分析条件的选择 二、显色反应条件的选择 （一）对显色反应的要求 二、定量方法 （一）单组分定量 1. 标准曲线法 * 在分析中，选择最佳的分析条件可使测定结果具有较高的灵敏度和准确度。 一、溶剂的选择 注意溶剂的截止波长和长移、短移 在可见光区进行测定有很多方便之处。如果待测物本身有色，可直接进行测定；如果待测物无色或颜色较浅，则往往通过显色反应使待测物成为在可见区有吸收的物质。 能与无色物质反应生成有色物质的试剂称为显色剂，生成有色物质的反应称为显色反应，即 待测组分 显色剂 有色 化合物 显色反应 常见的显色反应络合、氧还、重氮—偶联反应等。 1. 选择性好，干扰少或干扰易消除。显色剂只与待测组分或少数干扰组分生成有色物质。或显色剂与待测组分生成的物质的最大吸收波长与显色剂与干扰组分生成的物质的最大吸收波长相差较大。通过控制条件防止干扰组分与显色剂发生反应。 2. 生成的有色物应具有较大的 ?，即具有较高的灵敏度。A 的最佳范围为0.2～0.8，则 ? 最低为多少。 若c＝10-6 mol/L，则 ? 应大于1×105。 3. 生成的有色物应具有一定的稳定性，在测量过程中吸光物质的吸光度无变化。 4. 反应物的组成固定。 为了满足以上要求，必须控制反应条件 （二）显色反应条件的选择 显色反应能否满足上述要求，除选择合适的显色剂外，控制显色反应条件也是非常重要的。因此，必须了解影响显色反应平衡及反应速度的各种因素，并进行严格控制，才能保证分析结果的准确可靠。 1. 显色剂的用量 通常显色反应是可逆的，为了使待测组分完全定量地转变为吸光物质，显色剂必须过量。过量的显色剂可使反应完全，但显色剂用量过大，可能改变吸光物质的组成。所以显色剂的用量应遵守过量、适量、定量。 最适宜的显色剂用量是通过实验确定的，即固定其它条件，改变显色剂的用量，测吸光度，用 A 对显色剂用量作图，确定显色剂的最适宜的用量。 2. 溶液的pH值 酸效应，最重要，直接影响显色剂的浓度和生成物的颜色。不少有机显色剂是有机弱酸或弱碱，溶液pH变化，显色剂的存在型体会发生变化，显色剂的颜色以及显色反应的完全程度都会受到影响。 一些显色剂还具有酸碱指示剂的性质，如：PAR R2- HR- H2R 红 橙红 黄 pH＞13 pH=7～10 pH＜6 二甲酚橙 XO 红 黄 pH＞6 pH＜6 磺基水杨酸（SS）与Fe3+的络合物 FeSS+ 黄色 pH=8～11.5 pH＞12 橙红 紫红 pH=4～8 pH=1.8～2.5 显色反应的最适宜酸度，应通过实验确定。方法是：固定溶液中待测物、显色剂的浓度，只改变酸度，测吸光度，以 A 对pH作图，找出适宜的酸度范围，如范围较窄，则选用缓冲溶液。注意参比也要调pH值。 3. 显色时间 有的显色反应瞬间即可完成，即显色后即可测定；有的显色反应进行较慢，需经过一定时间才能完全生成吸光物质；有些情况下，吸光度得到一定值后又会慢慢降低。实际工作中，也应通过测定样品溶液在某波长下的吸光度随时间变化曲线，确定显色反应的最佳时间。 4. 显色温度 显色反应一般在室温下进行，但有些反应速度较慢，需在加热条件下才能迅速完成。有些反应产物在高温下会分解而褪色。对需要加热才能完成的显色反应，应通过实验确定适宜的显色反应温度。需要注意的是：待测溶液与标准溶液的温度要尽量一致，有时要用恒温水浴控温。 5. 有机溶剂 （1）影响络合物的解离度，如FeSCN在水中解离，加入丙酮后，解离度降低，颜色加深，提高了灵敏度。 （2）影响反应速度，如氯磺酚S测Nb（V），水中显色几个小时，加入少量丙酮，显色时间仅30min。 6. 干扰物的影响及消除方法 （1）干扰物本身有色或与显色剂形成有色化合物，有吸收； （2）在显色条件下，干扰物沉淀； （3）与待测离子生成更稳定的化合物。 消除方法 （1）控制酸度 （2）选择性高的显色剂，丁二酮肟 （3）掩蔽（络合、氧还） （4）选择适当的参比溶液 三、测定条件的选择 测定条件包括测定波长、狭缝宽度、吸光度读数范围和参比溶液。 （一）选择测定波长，一般选择最大吸收波长作为测定波长，为什么？ 525 545 （二）选择狭缝宽度 直接影响测定的灵敏度和工作曲线的线形范围。宽，则单色性变差，测定灵敏度降低（?变小）、工作曲线偏离比尔定律、吸收光谱的精细结构消失；窄，光通量小，影响测定的准确度。一般以减小狭缝宽度