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血液病细胞遗传学 前 言 白血病的诊断分型曾长期沿用传统的FAB分类法，由于细胞遗传学和免疫学的应用，创建了MIC分类，提高了白血病的诊断水平。 WHO提议的白血病和MDS诊断分型也是以细胞遗传学为主要依据。 细胞遗传学不但揭示了许多具有重要诊断和预后价值的染色体畸变类型，也为从分子水平上研究白血病的基因提供重要线索。 染色体一般概念 染色体（chromosome）一词由Waldeyer在1988年首先提出，意即可染色的小体。 染色体超微结构显示染色体是由直径10nm的DNA-组蛋白高度螺旋化的纤维组成。基本单位是核小体。每一条染色体单体可看作一条双螺旋的DNA分子。 染色体是遗传物质—基因的载体，控制人类形态、生理和生化等特征的基因呈直线排列在染色体上。 正常人类染色体的分组及识别 正常人体细胞的染色体组成为二倍体，包括22对常染色体和一对性染色体。每条染色体由两条染色单体组成，中间狭窄处称为着丝粒（主缢痕），将染色体分为短臂（p）和长臂（q）。染色体臂的末端存在一种结构—端粒，有保持染色体的完整性的功能。 根据染色体相对长度、着丝粒位置、长短臂比率、随体和次缢痕有无等参数将染色体分为A、B、C、D、E、F、G等七组。 中期染色体经过DNA变性、胰酶消化或荧光染色等处理，可出现沿纵轴排列的明暗相间的带纹。按照染色体上特征性的标志，可将每个臂从内到外分为若干区，每个区又可分为若干条带，每条带又再分为若干滚亚带。由于每条染色体带纹的数量和宽度是相对恒定的，根据带型的不同可识别每条染色体及其片段。例：1q34.1 染色体异常种类及发生机制 一、染色体数目的异常 1、单倍体（n） 2、多倍体（3n或4n） 3、非整倍体（单体、三体等）：有丝分裂过程中染色体不分离或丢失. 二、染色体结构的异常 由于各种物理、化学和生物因素导致染色体断裂和重接，从而引起各种不同类型的染色体结构畸变： 1、缺失(deletion, del）：末端缺失、中间缺失 2、重复(duplication, dup) 3、易位(translocation, t)：单方易位、相互易位、罗伯逊易位、插入 易位、串联易位、 复杂易位 4、环状染色体(ring chromosome, r) 5、等臂染色体(isochromosome, i) 6、标记染色体(marker chromosome, mar)：形态奇特来源不明的染 色体重排 7、双着丝粒染色体(dicentric chromosome, dic)： 8、双微体(dmin)：染色体断裂形成的成对无着丝粒微小染色体片段 9、衍生染色体(derivative chromosome, der) 血液病的细胞遗传学发展 一、非显带时期 二、显带时期 三、FISH时期 四、多FISH时期 血液病细胞遗传学研究方法 一、标本来源和采集 白血病、MDS等通常采用骨髓液，抽取量视外周血白细胞数。 淋巴瘤采用淋巴结穿刺液或淋巴结活检标本制备染色体，只有侵犯骨髓时方可采用骨髓进行研究。 当外周血白细胞数在10×109/L以上，原幼细胞30%时，可采用外周血细胞进行短期培养。 血液病细胞遗传学研究方法 二、染色体制备 直接法 短期培养法 同步培养法 高中期相法 步骤：接种→培养→秋水仙素→低渗→固定→滴片 →显带 → 染色→镜下观察。 血液病细胞遗传学研究方法 三、染色体显带 Q带 G带 R带：热处理姬姆萨R显带法 C带 染色体荧光原位杂交技术（FISH） 定义：利用已知核酸序列作为探针，以荧光素直接标记或 先以非放射性物质标记后与靶DNA进行杂交，再 通过免疫细胞化学过程连接上荧光素标记物，最后 在荧光素显微镜下观察杂交信号，从而对标本中待 测核酸进行定性、定位和定量分析。 原理：利用DNA变性后双链解开变成单链，在适宜温度和 离子强度下退火后可和互补的DNA链形成稳定的异 源双链。 方法：染色体制备→探针制备→杂交→杂交后洗涤→荧光 检测→荧光显微镜观察 染色体荧光原位杂交技术（FISH） 应用： 1、检测