[工作范文]第4章 细胞培养.ppt

第二篇 动物细胞工程 4.1 培养细胞的生物学特性 4.1.1 体外培养细胞的类型 是否贴壁？？ 1）贴壁型细胞:附着在某一固相支持物表面才  能生长的细胞。 2）悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而 在悬浮状态下即可生长的细胞。 贴壁型 粘附:是大多数有机体细胞在体内生存和生长发育的基本存在方式。基于粘附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织，有机体的绝大多数细胞必须粘附于一固相表面才能生存和生长. 培养时：这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要粘附于某一固相表面才能生存和生长，因而属于贴壁型细胞。  1、成纤维细胞型：胞体呈梭型，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状。除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为成纤维细胞。 2、上皮型细胞：细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细胞彼此紧密相连成单层膜。生长时呈膜状移动，处于膜边缘的细胞总与膜相连，很少单独行动。起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。 3、游走细胞型：呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。 4、多型细胞型：有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。  成纤维细胞样细胞 名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的 来源：由中胚层间充质组织起源的组织 如：真正的成纤维细胞心肌，平滑肌，成骨细胞， 血管内皮 形态：似体内成纤维细胞的形态胞体梭形或不规则三角形 胞质向外伸出2—3个长短不等的突起中有卵圆形核 鸡胚胎成纤维细胞 成纤维细胞贴壁和扩展过程 上皮样细胞 血清 Hela 高血清 低血清 成纤维细胞样 上皮样细胞 pH Hela 太酸或太碱 标准pH 成纤维细胞样 上皮样细胞 细胞密度 3T3 低密度 高密度 成纤维细胞样 上皮样细胞 生长状态改变 悬浮或贴附 悬浮 贴附 圆形 成纤维或上皮样 转化与否 未转化 转化后 成纤维样 可成上皮样 贴壁型细胞附着在某一固相支持物表面才能生长，贴壁后呈现特定的形态特征。如图所示的细胞类型称为 . DT40 is a B cell line derived from an avian lymphoma in a chicken. 4.1.2 培养细胞的生长特点正常动物细胞培养的典型特征（P39） 核型（染色体）正常，表明没有明显的基因改变 细胞的传代次数大约在50代左右，有限的寿命反应了细胞的生长调节 细胞无恶性，表现在将该细胞注入免疫抑制动物不能形成肿瘤； 贴壁依赖、接触抑制和密度抑制表明其增殖受到抑制，当细胞在介质表面生长至汇合单层时增殖就停止。 接触抑制 细胞相互接触后，如培养的是正常细胞，由于细胞的相互接触能抑制细胞的运动，这种现象称接触抑制（Contact Inhibition）。 细胞接触汇合成片后，虽发生接触抑制，只要营养充分，细胞仍然能够进行增殖分裂，因此细胞数量仍在增多。但当细胞密度进一步增大，培养液中营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制，导致细胞分裂停止。 Contact Inhibition 4.1.3 培养细胞的生长与增殖过程 1 单个细胞的生长过程 Living Cell Dynamics 4.1.4 培养细胞的遗传学特征 染色体 细胞性别 核型正常 Barr body 定义：在哺乳动物体细胞核中，除一条X染色体外，其余的X染色体常浓缩成染色较深的染色质体，此即为巴氏小体，又称X小体，通常位于间期核膜边缘。 1949年，美国学者巴尔（M.L.Barr）等发现雌猫的神经细胞间期核中有一个深染的小体而雄猫却没有。在人类，男性细胞核中很少或根本