生物技术之植物转基因课件演示.pptVIP

第六节 植物遗传转化体系;一、植物转化载体系统;植物转基因载体--启动子;诱导型启动子;;;;;克隆表达载体;;;;;;;;二、植物遗传转化的方法;几乎所有的双子叶植物尤其是豆科类植物的根部常常会形成根瘤，这是由于植物根部被一种革兰氏阴性土壤杆菌农杆根瘤菌（A. tumefaciens）感染所致，其致瘤特性是由该菌细胞内的野生型质粒 Ti（Tumor-inducing）介导的。;农杆菌致病－冠瘿瘤;农杆菌生物学特性;;; Ti 质粒特性;Ti 质粒的图谱;T-DNA;Vir 区;部分Vir蛋白在农杆菌中和在植物中的功能 ;Ti 质粒致瘤的分子机制; 农杆菌介导的植物转化机理;农杆菌与植物互作的过程;农杆菌与植物互作分子基础;农杆菌对植物吸附;T－DNA剪切与加工 ;T－DNA包装 ;农杆菌的T－DNA输出通道;T－复合体在植物细胞中运输;T-DNA的染色体整合机制;Ti 质粒的改造;农杆菌转化载体系统;;1 愈伤诱导;农杆菌转化的优点;2、植物病毒介导的转染程序; 病毒载体的优势; 利用病毒载体转化植物细胞的策略; 以双链DNA病毒花椰菜花斑病毒（CaMV）基因组作为载体，去除有关的致病性基因，换上外源基因，体外包装成有感染力的病毒颗粒，转染植物细胞原生质体，并由此再生成整株植物。 ; 植物双生病毒（Geminiviruses）为一单链DNA病毒，成熟的双生病毒呈双颗粒状，每一个颗粒中含有一条不同的DNA单链。其中A链能单独在植物细胞中复制，并含有一部分病毒包衣蛋白基因；B链编码另一部分包衣蛋白基因及感染性基因。A、B两条链必须同处于一个植物细胞中，方能形成有感染力的病毒。双生病毒具有广泛的宿主细胞范围，因此是一种很有潜力的植物病毒载体。 ;转染植物组织;1984 年科学家发现，超螺旋结构的细菌质粒，虽然不能在植物细胞中复制，但可以重组整合到植物染色体内。 重组机制并不清楚。 细菌质粒与植物DNA之间没有同源性。 整合是随机的发生在植物染色体的任何位点。 受这一现象的启发产生了基因直接转化技术。 ;3. 基因枪法;基因枪;基因枪工作原理;基因枪法优点：;4 电击法;电击法的主要原理是将原生质体在溶液中与DNA混合,然后利用高压电脉冲作用,使原生质体膜的某些部位被击穿而产生可回复的小孔,外源DNA可通过小孔进入原生质体内,而且不影响经电击处理的原生质体再生植物的能力. ;电击法优缺点：;5 聚乙二醇法 ;6 其他直接转化的方法;7、植物原生质体的再生程序;高等植物原生质体制备和再生程序：;Subcellular localization of MIP2 ; 植物原生质体的 再生程序;种质系统法;种质系统法的特点：;8. 花粉管导入法;; 花粉落到柱头上以后，在柱头上黏液的刺激下开始萌发，长出花粉管。花粉管穿过花柱，进入子房，一直到达胚珠。花粉管中的精子随着花粉管的伸长而向下移动，最终进入胚珠内部。胚珠里面有卵细胞，它跟来自花粉管的精子结合，形成受精卵。 ;优点：;影响转化的主要因素：;应用：;9、 浸泡转化法;外源DNA 进入细胞内可能的途径：;10、 胚囊、子房注射法;主要原理依据：;11、 整株感染法（in planta）;拟南芥(Arabidopsis thaliana) 整体转化;Time of inoculation relative to flower development is crucial.;