实用组织化学技术-常规病理组织学和组织化学(研究生)课件演示.pptVIP

实用组织化学技术;细胞化学和组织化学 cytochemistry and histochemistry 是以细胞学、组织学为基础，运用物理的和化学的技术方法显示细胞组织结构中各种化学成分，并对这些化学物质进行定性、定位、定量（半定量），从而分析研究生物在生理或病理状态下细胞组织的代谢、机能及形态变化规律。 其在医学研究中具有广泛的应用价值。;细胞和组织化学方法其原理是运用已知的化学反应过程使细胞组织内的各种化学物质在原位形成可见的最终有色产物。 光学显微镜观察－显微镜细胞组织化学 电子显微镜观察－电镜细胞化学 免疫技术方法 －免疫组织化学 免疫电镜细胞化学 用细胞和组织化学方法显示细胞组织结构中各种酶的定性、定位、定量－酶组织化学 酶组织化学－宏观酶组织化学 光镜酶组织化学 电镜酶组织化学;细胞和组织化学方法研究的范围 1. 组织细胞中的无机物质：主要包括钾、钙、锌、铜、汞等金属；氯化物、磷酸盐等盐类；以及各种无机放射性物质等。 2. 组织细胞中的有机物质：主要包括中性脂肪、磷脂类、胆固醇、中性和酸性粘多糖类、糖原、粘液蛋白、淀粉、类淀粉物质、黑色素、脂褐素、胆色素、氨基酸、肽、蛋白质、DNA、RNA、各种维生素等。 3. 组织细胞中各种酶类：如碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、胆碱酯酶、细胞色素氧化酶、琥珀酸脱氢酶、乳酸脱氢酶等--蛋白质。;细胞和组织化学方法的设计要求: 1. 必须最大限度地保存细胞和组织中各种化学成分和/或酶的活性，以保证定性、定量研究； 2. 必须最有效地保持细胞组织固有的形态结构，以保证化学成分和各种酶在细胞组织中的定位； 3. 必须掌握被检测的化学物质特性，如水溶性、脂溶性、溶解度及特异反应等； 4. 必须掌握被检测各种酶的特性，如酶的功能、酶存在的特定部位、酶反应的适宜温度和酸碱度、酶的特异激活剂和抑制剂、影响酶活性的因素等； 5. 必须做对照实验，借助阳性和阴性对照，正确分析实验结果，注意识别假阳性结果。;细胞和组织化学方法的基本技术;一、取材;各器官取材方法： 脑：取材应能反应出脑各部位的变化，一般采用冠状切面法，全脑包括（桥脑、延脑、小脑和脊髓颈段及脉络丛）。 取材部位如下： ⑴额极； ⑵中央前后回；⑶海马； ⑷内囊； ⑸丘脑； ⑹枕叶； ⑺脉络丛；⑻中脑； ⑼桥脑； ⑽ 延髓； ⑾小脑； ⑿脊髓颈段。 取材时要包括软脑膜、室脑膜或软脊膜（刀要锋利）。 垂体：取垂体时注意前、中、后叶和垂体柄都要兼顾，从前向后矢状切。 ;心：一般悄况下将心房、瓣膜、心室一起取下。也可分别取一块病变部位连同正常组织。也可单独取心室肌，乳突肌组织。 肺：常规取材应包括左、右两肺（五个肺叶），可根据病变需要决定取材块数，特殊情况下为区别在哪个肺叶上取的材可用形状做标志，在记录时记清楚。 肾：取材包括被膜、皮质、髓质和肾盂，并要求区别左、右肾。 胰：常规取胰体部，为长方形必要时加取胰头、胰尾。 肝：取长方形或三角形均可，带被膜。 脾：取材带被膜。;管腔脏器：取材时注意方向 大、小肠：考虑环行肌肉，沿肠管的长轴取（纵切）； 食管：以横切面为宜； 胃：常规取材以胃底为好； 气管：横切、纵切均要有。 总之管腔脏器的各层构造都要取到。 为了防止标本入固定液后变形，将材料取下后（如剪开的大小肠、胃等组织）将浆膜面铺在滤纸上，然后入固定液内，这样能防止或减少组织受压变形与收缩。;二、组织固定;组织固定的目的： ⑴ 阻止死后变化，防止组织的自溶与腐败。 ⑵ 使组织的结构保存下来，如蛋白质，脂肪、糖元、酶等各种成份与生活时的形态相仿。 ⑶ 便于染色，同时对组织有媒染作用，使不同的组织成份对染料有不同的亲和力，使细胞各部易于受色。 ⑷ 能使组织硬化，为做薄切片打下基础。 ;5. 多聚甲醛缓冲固定液 paraformaldehyde 多聚甲醛 4g，加入0.1mol/L磷酸缓冲液 pH7.2 100ml中，加热60～80℃溶解。 固定15min～24h,0～4℃。 主要用于科研组织标本的固定，尤其用于免疫组织化学染色的组织固定，保护抗原决定簇不被封闭。 6.戊二醛磷酸缓冲固定液 glutaric dialdehyde 25%戊二醛10ml，加入0.1mol/L磷酸缓冲液 pH7.2～7.4 90ml中。 固定时间为60min, 0～4℃。 主要用于科研组织标本的固定，尤其用于电镜超薄切片的小组织块标本的初固定。;组织固定方法;4.