Module5相对定量-ΔΔCT法和相对标准曲线法-ThermoFisher.PDF

Module 5 ：相对定量 -∆∆CT法和相对标准曲线法 The world leader in serving science 1 相对定量 PCR: 相对基因表达量 2 示例实验 未处理 样本 处理后 样本 目的基因：Plat 1 问题:样本处理后，目的基因的表达量有什么变化? 3 目的基因与目的基因的比较 Rn Ct = 24 – 23 = 1 Ct = 24 Cycles Ct =23 未处理组：目的基因 处理组：目的基因 4 如果加入内参基因会怎样呢? Rn Ct = 23 – 13 = 10 Ct = 24 – 14 = 10 Ct =14 Ct = 24 Cycles Ct = 13 Ct = 23 未处理组：目的基因和内参基因 处理组：目的基因和内参基因 5 相对定量的方法 比较 Ct (∆∆Ct) 法 相对标准曲线法 样本间的倍数关系 6 ∆∆Ct 法 7 ∆∆Ct 法的必要条件 两个基因 ( 目的基因和内参基因) 必须有 相一致的扩增效率，并尽可能接近 100% ! 8 ∆∆Ct法如何确认扩增效率 每对引物一条标准曲线 9 初步判断扩增效率是否一致： 同时扩增目的基因和内参基因， 通过 查看扩增曲线中指数增长期是否平行来确 定扩增效率是否相似。