抗生素效价检定法的研究进展.docVIP

抗生素效价检定的研究进展 　　【摘 要】：目的:了解近 3年来抗生素效价检定研究的新进展。方法:综述近 3年文献,按方法改进和方法替代从不同品种类型和检定条进行介绍。结果:微生物效价检定从检定方法和检定条件的改进以及寻求新的检定方法方面有较大进展。结论:必须继续深入研究并做好论证工作,以利于推广。[关键词 ]：　抗生素类，抗生素效价，药物筛选 引言： 抗生素微生物效价检定法是药典常规检定方法, 它是以抗菌活性为指标来衡量抗生素中有效成分效力的一种方法。其原理与临床应用的要求相符合,能直接反映出抗生素的疗效,还具有供试品量少、灵敏度高、便于掌握等特点。因此,被广泛应用于抗生素品种的效价检定。但该方法也存在操作步骤多、耗时长、试验影响因素较多的缺点,所以许多效价检定工作者都在积极探索方法的改进和替代方法的研究, 以使检定方法更趋完善。为了解国 内近几年抗生素效价检定的研究状况。按不同品种类型和检定条件进行归纳总结。从方法的改进：在检定条件上从制备菌悬液方法和制备上层培养基菌层及打孔方法的改进进行总结。在品种类型上，从乙旋螺旋霉素，硫酸奈替米星，依托红霉素到吉他霉素测定方法的改进进行总结。方法的替代：从手工法到用软件控制计算机扫描仪采集抗生素抑菌圈直径，将其数据按药典要求自动进行生物检定统计法。在品种类型上：从硫酸核糖霉素注射液到硫酸异帕米星，进行归纳总结以上方法的改进使抗生素效价检定更趋完善，但也存在一些不足，有待继续进行深入研究并做好论证工作。以下为抗生素效价检定的研究进展归纳总结。 　　 1抗生素效价检定方法的改进 　　 1. 1制备菌悬液的方法改进　直接刮取过夜培养的斜面中的供试菌 　 到10 mL生理盐水中作为菌悬液（钱存柔等，1999，范秀容等，1988）。由于斜面制作和菌体生长情况的差异，菌悬液中的菌落总数不固定，而抑菌圈的直径与上层培养基中的菌体浓度密切相关（姬文英等，2005），这势必造成实验重复性差，影响结果的准确度。改进方法：采用活化的供试菌于LB液体培养基中震荡过夜培养,菌液用LB液体培养基稀释至OD620=0.200，作为备用菌液。 　　 1. 2制备上层培养基菌层的改进　制备上层培养基菌层的改进目前大 　 多数方法介绍在100 mL上层培养基中加入菌悬液，充分摇匀后每个板中加注5 mL或10 mL带菌琼脂（钱存柔等，1999，杨革，2004）。但是由于每个平皿中的上层培养基量难以控制，如果从大瓶内用刻度吸管吸取带菌培养基，吸管中培养基量少极易冷却，加在底层培养基上就不易均匀铺开，导致菌层厚度不均，势必影响到抑菌圈的直径；或者很难铺满整个平板，对后续的打孔必然会产生影响。改进方法：采用了事先把配制好的半固体培养基分装在具塞试管内，每管5 mL，湿热灭菌后放在50℃水浴锅内保温。实验中,再分别加入制备好的菌液混匀，配制成带菌琼脂。然后迅速倒在已冷却的底层培养基上，转动培养皿使其均匀铺开。 　　 1. 3　打孔方法的改进　 打孔的改进目前大多数方法介绍用牛津杯　 或用打孔器打孔的方法进行打孔，但在实验过程中发现牛津杯的放置时有一定的讲究，需小心地从同一高度垂直放在菌层培养基上，不得下陷不得倾斜，不能用悬空往下掉的方法，而且牛津杯放置太浅则平皿转移过程中容易倒掉，放置太厚又影响抗生素的扩散。学生实验中人数多，而且又是第1次练习，该操作步骤很难统一。参照文献报导（王进强，2005）进行了改进方法：采用内径为6 mm左右的无菌吸管进行打孔笔者认为管碟法测定抗生素效价的原理是抗生素的扩散，采用吸管打孔操作简单易行，又能达到使抗生素扩散的目的。 1. 4　乙酰螺旋霉素 按部颁标准进行样品检定时, 高剂量抑菌圈常达不到中国药典 (1995年版)的要求，刘炳茹等采用不同PH的缓冲液和培养基进行检定条件的筛选，结果采用 pH 9. 0号培养基, 在不改变其他检定条件下进行检定,抑菌圈直径增大,边缘清晰, 高、低剂量抑菌圈直径之差变大,使平均可信限率降低,达到药典要求。另每次配制培养基后 都要测试调节 pH值至 9. 0,这样结果易达到生物检定的各项指标。少了测量误差。　 　 　　 1. 5　硫酸奈替米星 部颁试行标准规定本品含量测定采用微生物效价检定法,检定菌为α金黄色葡萄球菌。因试验菌对培养基条件要求较高,需新鲜传代复壮,洗菌,且加菌的温度低 (48℃) ,接近培养基凝固温度 (4