三孢布拉氏霉菌番茄红素环化酶多克隆抗体的制备-高校化学工程学报.PDFVIP

第27 卷第6 期 高 校 化 学 工 程 学 报 No.6 Vol.27 2013 年12 月 Journal of Chemical Engineering of Chinese Universities Dec. 2013 文章编号：1003-9015(2013)06-1039-06 三孢布拉氏霉菌番茄红素环化酶多克隆抗体的制备及鉴定 李 晔1,2 1 1 1 1 1 2 , 危 晴 , 金丽华 , 王晓杰 , 辛秀兰 , 苏东海 , 袁其朋 (1. 北京电子科技职业学院 生物技术系, 北京 100029; 2. 北京化工大学 生命科学与技术学院, 北京 100029) 摘 要：对三孢布拉氏霉菌番茄红素环化酶(CarRA)进行抗原表位分析并制备兔多克隆抗体。运用GOLDENKEY 分子 生物学软件对三孢布拉氏霉菌CarRA 结构蛋白的抗原表位及其二级结构进行了分析比较，结合现有的抗原表位选取原 则从中筛选了一段显示表位特征的氨基酸残基序列，应用固相合成法合成三孢布拉氏霉菌 CarRA 多肽，然后将其与 KLH 偶联制成免疫原，应用于动物免疫及多克隆抗体的制备，对该多抗与三孢布拉氏霉菌 CarRA 的反应性进行了检 测。获得了三孢布拉氏霉菌CarRA 的多抗，该抗体经间接酶联免疫吸附测定法检测其效价为1:32000，Dot blot 检测在 三个稀释度下都出现了目的条带，证实该抗体具有较好的反应性和特异性。成功制备了三孢布拉氏霉菌CarRA 多抗， 为进一步明确发酵促进剂的作用机制及其对三孢布拉氏霉菌代谢网络的影响，对CarRA 进行定量以及对其相关功能进 行深入研究提供了有利条件。 关键词：三孢布拉氏霉菌；CarRA ；多肽合成；多克隆抗体；制备；鉴定 中图分类号：R392.11 文献标识码：A DOI ：10.3969/j.issn.1003-9015.2013.06.019 Preparation and Identification of Polyclone Antibody Against Blakeslea trispora CarRA 1,2 1 1 1 1 1 2 LI Ye , WEI Qing , JIN Li-hua , WANG Xiao-jie , XIN Xiu-lan , SU Dong-hai , YUAN Qi-peng (1. Department of Biotechnology, Beijing Polytechnic, Beijing 100029, China; 2. College of Life Science and Technology, Beijing University of Chemical Technology, Beijing 100029, China) Abstract: To analyze the epitope of Blakeslea trispora CarRA protein and prepare its polyclonal antibody. Combined with existing antigen epitope selectio