在mTeSR1培养基及Geltrex基质中使用LipofectamineStem试剂转染.PDF

转染实验方案 Lipofectamine Stem转染试剂 在mTeSR1培养基及Geltrex基质中使用Lipofectamine Stem试剂转染多能性干细胞 PSC生长培养基、传代试剂及络合培养基 组分 货号 mTeSR1培养基(ST EMCELL Technologies) 05850 Geltrex适用于hESC且不含LDEV的还原型生长因子基底膜基质 1413302 不含钙和镁的杜氏磷酸盐缓冲液(DPBS) Versene溶液 RevitaCell添加剂 A2644501 Opti-MEM I减血清培养基 使用未分化的人多能性干细胞(PSC) ，在无滋养层培养系 • 提示：使用Ve rse ne溶液进行PSC 的常规传代与扩增 统(如mTeSR™1培养基，ST EMCELL Technologies)及基 时，重新接种5-10个细胞的较大细胞团块可以促进细胞 质(如Gibco™ Geltrex ™基质) 中扩增，是实现高效转染的 在Geltrex基质上的重新贴壁以及在mTeSR1培养基中的 理想选择。在上述培养系统中培养的PSC可使用Gibco™ 存活，无需加入Gibco™ RevitaCell™添加剂。 Versene™溶液成功传代。在扩增和接种或重新接种细胞 使用Geltrex基质预包被24孔板1. 用于转染的过程中，建议使用这种温和的基于EDTA的解离 1. 在含有GlutaMAX ™添加剂的冷的Gibco™ DMEM/ F-12 方法。该方法有助于确保PSC在传代过程中不会分化或死 培养基中(货号：10565)配制1:100稀释的Geltrex基质。 亡，生成均质的小细胞团块，以实现高效转染。 2. 在24孔板的每个孔中加入300 μL稀释的Geltrex基质， ° 传代 37 C孵育至少1小时，待用。 • 以您选择的培养形式维持PSC ，如包被有Geltrex基质的 • 提示：Gelt rex基质包被的培养板可提前制备，并置于 6孔板、60 cm培养皿或T-75培养瓶，使用mTeSR1培养 ° 4 C保存至多2周。接种细胞前先室温平衡1小时。 基培养。在6孔板中扩增PSC ，然后至24孔板转染，是 本实验方案采用的常规形式。每3至5天当PSC生长至约 85%汇合度时，传代一次。 • 当PSC达到85%融合度前，每3至5天传代一次。 接种细胞用于转染 8. 收集各孔中的内容物至15 mL锥形管中。 1. 当PSC无滋养层培养物的融合度低于85%时，去除mTeSR1 9. 进行总的活细胞计数，包括单细胞以及小的细胞团块 培养基，在6孔板的每个孔