应用具有扩展质量数范围的三重四极杆质谱仪对高质荷比-Agilent.PDFVIP

应用具有扩展质量数范围的三重四 极杆质谱仪对高质荷比多肽离子进 行常规分析 应用简报 靶向蛋白质组学 作者 前言 Linfeng Wu、Christine A. Miller、 使用液相色谱/三重四极杆质谱仪对蛋白质进行常规的高通量定量分析时，我 Jordy Hsiao、Te-wei Chu、 们将多肽作为相应蛋白质的替代物。选择独特的多肽以及适合每种目标多肽的 Behrooz Zekavat 和 Anabel Fandino MRM 离子对是分析成功的关键步骤。考虑到仪器质量数范围限制，分析时通常 不会选择具有高m/z 母离子或子离子的多肽。但是，若要解决生物学问题，此 类多肽也许能提供关键信息，甚至可能是唯一的分析选择。此类例子包括具有 大型疏水性跨膜结构域的膜蛋白、带有多种翻译后修饰结构的蛋白质，以及内 源性多肽等等。 本应用简报将介绍 Agilent 6495B 三重四极杆质谱仪分析具有高m/z 子离子的多 m/z 肽的性能，并展示将分析的质量数范围扩展至 3000 带来的优势。将胰蛋白 酶消解的单克隆抗体 (mAb) 标准品和 HeLa 细胞膜富集提取物分别作为简单样品 和复杂样品进行分析。 实验方法 LC/MS/MS 系统 制备 mAb 消解物的稀释系列，并将每 将 Agilent 1290 Infinity UHPLC 系统连 个进样浓度的信号响应相对于 mAb 消 蛋白质/多肽选择 接至质量数范围达 3000 u 的 6495B 三 解物的总柱上进样量作图，据此进行 使用 Agilent 6550 Q-TOF 质谱仪，在数 重四极杆质谱仪。LC/MS 实验采用 糖肽定量分析。 据依赖型模式下采集抗 IL8 mAb 消解 安捷伦喷射流 (AJS) 离子源和 Agilent 此外，通过将每种子离子的信号响应 物和 HeLa 细胞膜富集蛋白质消解物 Poroshell 120 EC-C18, 2.1 × 100 mm 2.7 µm 相对于对应的柱上进样量作图，执行 的 LC/MS 数据。使用 Agilent Spectrum 色谱柱（部件号 695775-902）进行。 HeLa 细胞膜多肽的定量分析。 Mill （B.05.00.181 SP1 版）比对适用的 使用 3.5 分钟的 MRM 方法分析 mAb 消 数据库检索原始数据，鉴定出产生高 解物，HeLa 细胞膜消解物则使用 21 分 m/z 子离子的多肽，以此测试 Agilent 钟的 MRM 方法分析。 6495B 三重四极杆质谱仪的性能。