李氏杆菌的研究进展.docVIP

李氏杆菌的研究进展 李氏杆菌病是由产单核细胞增多性李氏杆菌(Listeria monocytogenes)引起的一种人兽共患病[1]能引起人和动物特别是有免疫功能障碍的人和动物发生脑膜炎、败血症、流产等症状，一般呈散发性，其致死率较高，是一种危害较大的急性传染病[2-3]。患病畜禽和带菌畜禽为传染源，患病畜禽可通过各种排泄物、分泌物排出病菌．污染环境、饲草、饲料及水源。可通过消化道、呼吸道、眼结膜、皮肤创伤等感染。饲料和饮水是主要传播媒介．另外鼠类也可传播。当冬春季节缺乏青饲料、气侯骤变、内寄生虫或沙门氏菌感染等，均可成为发生本病的诱因。 近年来，李氏杆菌病在我国部分毛皮动物养殖地区时有发生，对畜牧业发展和人类健康造成严重威胁[4]。1、李氏杆菌的生物学特性 1.1 培养特性 该菌均为微需氧菌，在普通琼脂培养基上虽可生长，但较贫瘠，培养24 h后，可形成直径为0.5～1.0 mm的圆形、灰色透明、边缘整齐的菌落；而在鲜血琼脂培养基生长较好，菌落可形成狭窄的β溶血环，常常不超过菌落的边缘，仅在移动菌落后才可检出；在1％葡萄糖琼脂培养基上生长更佳，菌体比在普通琼脂培养基上的个体明显增大；在普通肉汤中培养4 h后，呈均匀浑浊，管底有少量絮状沉淀，不形成菌膜与壁环；在麦康凯琼脂培养基上不生长。该菌在4℃有缓慢发育的特性。该菌在各种培养基上，发育初期的菌落透光检查呈淡蓝色，在暗的斜射光线下观察时，有特殊的乳青白色荧光，这是李氏杆菌种的特征[5]。 1.2 生化试验及药敏试验 该分离菌能迅速发酵葡萄糖、麦芽糖产酸不产气，可缓慢发酵蔗糖、乳糖产酸不产气。MR和VP反应阳性，过氧化氢酶试验阳性，不还原硝酸盐，不形成吲哚，不能利用枸橼酸盐[9]。 该菌对头孢唑啉、氨苄西林、链霉素药物高度敏感，对左氧氟沙星、庆大霉素药物中度敏感、对多粘菌素药物低度敏感，而对头孢他啶、头孢呋辛钠耐药（药敏片的直径为6.0mm）。 2、临床特征及病理变化 2.1 临床症状 小白鼠接种李氏杆菌12 h后表现食欲不振，精神倦怠，结膜炎。被毛蓬乱，运动缓慢，有的呼吸困难，呈腹式呼吸病程长短差异较大，病程短的接种后不足36 h就发生死亡。病程长的可持续4d。表现为身体向一侧倾斜，后腿拖拉，共济失调，最后死亡。 该菌具有较强的致病性。李氏杆菌可使多种畜、禽感染发病，引起神经症状，而小白鼠患病的主要病变是肝、脾、心肌出现坏死灶[7]. 2.2 病理变化 剖检死亡的小白鼠可见胸腔积液，肺脏肿大边缘钝圆，表面可见红色出血斑，肝脏肿大，紫红色，表面有弥漫性灰白色点状病灶。脾脏肿大，表面散见黑褐色的病灶，脑部充血[6]。 3、李氏杆菌的毒力因子 研究发现LM 血清变种1/2a通过兔子传代，培养物的毒性会逐代升高，而体外溶血素的产生水平与其对兔子的致病力不存在平行关系，说明其致病性与许多基因有关。L M 含有与胞内寄生生活循环有关的毒力基因2簇，称为李氏杆菌毒力岛l(LipI-1)和李氏杆菌毒力岛2(LipI-2)。LipI-1主要基因有hly-mpl-actA-plcB，plcA-prfA。hly编码L M 溶血素O(LLO)，可破坏吞噬体促进细胞进入胞液，是细菌在胞液内繁殖的先决条件，其缺失将使细菌毒力全部丧失，是LM 分泌的主要毒力因子，其溶细胞性可被巯基激活而被胆固醇和氧化剂所抑制。LLO 以252aa残基的前体形式合成，将预测的信号序列切割位点的4个aa残基缺失的LLO 蛋白在缺失hly基因的LM 中表达。出乎意料的是突变体LLO蛋白以正常的数量分泌到培养上清中，而且是完全溶血的。分泌的LLO分子N端测序显示，前体蛋白的N端加工发生在自然切割点下游的三个aa残基上，表达这种截断形式LLO 的L M 降低了对骨髓巨噬细胞和肝细胞吞噬小体膜的破坏能力。在小鼠模型中，该突变株的毒力降低了100倍。由这些结果可以推测成熟的LLO第一个N端aa残基直接参与吞噬小体的逃避和细菌的感染。mpl-actA-plcB这3种基因的产物与李氏杆菌在细胞间的直接传递，从而避免体液免疫系统有关。PrfA的产物是李氏杆菌所有基因簇转录激活所必需，是本菌唯一的毒力调节蛋白。LIPI-2又称内化素(in1)小岛，是李氏杆菌被非吞噬细胞内化所必需。Inl基因缺失可使LM 对小鼠的LD50明显增加。研究还发现L.M表达的in1表面蛋白，能与宿主受体E-Cadherin反应，促使其进入人的肠上皮细胞。与豚鼠的E-Cadherin相比小鼠的E-Cadherin不能与内化素作用。因此在豚鼠和表达人E-Cadherin的转基因小鼠中，内化素可以介导细菌对肠道细胞的入侵，使之穿过肠道屏障[10]。磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)基因编码一个分子量大约3.6万的蛋白，它在毒力因子中的确切作用尚不清楚。LM对小