[农学]hzau微生物遗传第四章微生物诱变育种.ppt

营养缺陷型鉴定步骤： 测定缺陷型菌株所需生长因子的类别 具体测缺陷该类别物质中的哪种生长因子 用单一生长因子进行复证试验。 ①氨基酸混合物、酪素水解物或蛋白胨，代表氨基酸类。 ②酵母浸出液，其中氨基酸、维生素、嘌呤、嘧啶均具有。 ③维生素混合物，代表维生素类。 ④核酸碱基混合液或酵母核酸(0.1％碱水解物)，代表嘌呤、嘧啶类。 通常分别用以下物质来代表氨基酸、维生素、核酸碱基： (1)缺陷型类别的测定 先选择缺陷型菌株所需用的类别代表物质： 用于营养缺陷型测定的氨基酸有 21种。一般用L-型氨基酸，而DL-型氨基酸虽然也可以使用，但要增加1倍的浓度。D-型氨基酸由于微生物难以吸收利用，不能使用。 用于鉴别缺陷型菌株的维生素约有15种。 核酸碱基有7种，包括腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤、次黄嘌呤、尿嘧啶、胞嘧啶及胸腺嘧啶。 要鉴定单缺氨基酸或维生素的营养缺陷型，较为简便的方法是分组测定法。把21种氨基酸，组合6组，每6种不同氨基酸归为一组。 (2) 缺陷型所需生长因子的测定 组别 一 1 7 8 9 10 11 二 2 7 12 13 14 15 三 3 8 12 16 17 18 四 4 9 13 16 19 20 五 5 10 14 17 19 21 六 6 11 15 18 20 21 组合生长因子 生长因子的配制方法： 把同一组的氨基酸粉末混合置于洁净的瓶中，加入灭菌的蒸馏水，充分溶解，置冰箱保存。 配制浓度：用于放线菌测定的氨基酸约1mg／ml 用于霉菌测定的约10mg／ml 维生素一般0.1mg／ml 生物素、维生素B12约0.01mg／ml 测定方法：缺陷型菌株和基本培养基混合制成平板，把 6组生长因子直接点加于同一琼脂平板上，或用滤纸片沾取后覆于琼脂平板上，培养后，观察哪一组或哪两个组区产生混浊生长圈，即可确定该菌株缺陷的生长因子。 生产上：微生物育种，协助解除代谢反馈调控机制，达到大量积累终产物的目的 天冬氨酸-β-半醛 二氨基庚二酸 赖氨酸 高丝氨酸 甲硫氨酸 苏氨酸 作为杂交育种、重组育种的遗传标记 遗传学研究中，转化、转导、原生质体融合、质粒和转座子研究中的标记。 二、营养缺陷型突变株的应用 O-琥珀酸高丝氨酸 天冬氨酸 Asp 天冬氨酰磷酸 天冬氨酸-β-半醛 ASA 高丝氨酸 Hse 二氨基庚二酸 DAP 赖氨酸 高丝氨酸磷酸 苏氨酸 Thr 甲硫氨酸 Met 异亮氨酸 Ile 优先合成 反馈抑制 ① ② ③ ④ ⑤ Leu 谷氨酸棒状菌、黄色短杆菌 乳糖发酵短杆菌 大肠杆菌 本章思考题： 何谓诱变育种？试述诱变育种在发酵工业中的作用和地位 在发酵工业生产中，理想的生产菌种应具备哪些性状？ 在诱变育种时，出发菌株如何选择？对菌悬液有何要求？ 针对不同微生物，如何选择诱变剂和诱变剂量？ 筛选产量突变株时，应考虑哪些基本环节？ 试述筛选产量突变株的简便程序。 营养缺陷型菌株的分离和筛选有哪些步骤？ 淘汰野生型菌株的方法有哪些？分别简述其原理？ 试述营养缺陷型检出和生长谱鉴定的方法？ 设计通过UV诱变大肠杆菌而得到组氨酸营养缺陷型突变株的实验程序或方案。 第四章 微生物诱变育种 诱变育种：是以人工手段诱发微生物基因突变，改变其遗传结构和功能，从多种多样的突变体中筛选出产量高、性状优良的突变株， 并设计出适合该突变株最佳的培养基和条件，使其在最适的工艺条件下最有效地合成产物。 基因突变是微生物变异的主要源泉，人工诱变是加速基因突变的重要手段。诱变育种有以下几个优点：速度快、收效大、方法简单。 分三个阶段：菌种基因型改变， 突变体筛选，产量评估 遗传性状稳定 纯净无污染 繁殖力强、生长速度快、短时间内能产生所需产物 能诱变产生遗传性变异 具有产量高、收得率高 理想的工业生产菌种必须具备： 出发菌株的选择 单孢子（单细胞）悬液的制备 诱变剂及诱变剂量的选择 诱变处理方法 高产菌株的分离 第一节 诱变育种的步骤 对出发菌株的要求： 对诱变因素敏感，变异幅度大，正突变率高 具有一定生产能力 具有有利性状，如生长速度快、营养要求低以及产孢子早而多的菌株 一、出发菌株 有时可考虑选择已发生其他变异的菌株作为出发菌株。 采用一类被称为“增变菌株”的变异菌株，它们对诱变剂的敏感性比原始菌株大为提高，更适宜作为出发菌株。 在选择产核苷酸或氨基酸的出发菌株时，应考虑能累积少量所需产物或其前体的菌株; 而在选择产抗生素的出发菌株时，最好选择已通过几次诱