五不同园艺植物花粉生活力的测定.pdf

实验五 不同园艺植物花粉生活 力的测定 一、实验目的 1.掌握园艺植物的花粉收集方法、花粉生活力 测定的不同方法。 2.观察花粉在离体条件下的萌发情况（花粉萌 发形成花粉管的外形、伸长过程以及萌发的长 度 ），为理解园艺植物的生殖过程及杂交育种 奠定基础。 二、实验原理 正常的成熟花粉粒具有较强的活力，在适 宜的培养条件下便能萌发和生长，在显微镜下 可直接观察计算其萌发率，以确定其活力。 花粉贮藏的原理在于创造一定的条件，使 花粉降低代谢强度，延长花粉的寿命。花粉寿命 的长短，因植物种类不同而异。在自然条件下， 大多数植物的花粉从花药散出后只能存活几小时， 几天或几个星期。 花粉寿命的长短除了遗传性的差异以外， 还与温度、湿度有密切的关系。通常高温高湿 下花粉呼吸旺盛，会很快失去生命力，但在极 干燥的条件下，花粉失去水分，也不利于保存。 • 试验发现苹果花粉在干燥状态下，可保存3 个月；如放在2 ～8℃ ，湿度80％的条件下， 经过5个星期即失去生活力。 • 丁香的花粉贮藏在干燥器中，15d以后发芽 率降到50％；至20d时，仅有个别花粉发芽； 到30d时，即全部死亡。 因此，暂时不用的花粉，应立即在适宜的 条件下贮藏，妥善保存。为保持花粉生活力则人 为采取减低其代谢强度，将其贮存于低温、干燥、 黑暗，并较为稳定的环境条件下，以保持其活力。 三、实验材料、主要仪器和试剂 1. 材料：不同园艺植物，任选3种 2. 主要仪器：镊子、显微镜、恒温箱、培养皿、 烧杯、玻璃棒、量缸、电磁炉、标签、记号笔、 离心管、冰箱、牙签、分析天平。 3. 主要试剂：琼脂、蔗糖、硼酸、无水CaCl2 、 I -KI、TTC、醋酸洋红、蒸馏水。 2 四、花粉生活力的不同测定方法 1.采集花朵 选择正常的、无病虫害的园艺植株上含苞待 放的正常花朵，采集后带回实验室剔除过大 或过小的。 2.收集花药及散粉 用镊子取出花药（每个园艺植物取20个花 蕾的花药）置于培养皿（纸盒-花粉量多）中， 写上标签，进行必要的加温处理（培养箱温度 25℃ ）使其散粉。 3.花粉的贮藏 散粉后将花粉收集于2ml的离心管（花粉瓶）中， 用封口膜密封盖子，写上标签置于冰箱（-20℃ ）内储 藏备用（或者不同温度25℃ ，5℃、0℃、-20℃、- 40℃和-86℃下贮藏）。 （一）形态检测法 1.原理： 具有品种典型性状的花粉粒作为有生活力的花 粉；小的、皱缩的、畸形的以及没有内含物的作为没有 生活力或生活力较弱的花粉。 2.步骤：花粉置于载玻片上，滴上1-2滴水，盖上盖玻片 观察，然后自制表格进行记载。 （二）染色检测法 1. I -KI染色测定法 2 （1 ）原理 多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀 粉，I -KI溶液可将其 染成蓝色。发育不良的花粉常呈 2 畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I -KI溶液染色 2 呈黄褐色。因此，可用I -KI溶液染色来测定花粉活 2 力。 （2 ）器材与用具 显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶； 烧杯；量筒；天平。 （3 ）试剂 I -KI溶液 2 （4 ）步骤 采集成熟花药，取一花药于载玻片上，加1 ～2滴 I -KI溶液用镊子将花药捣碎，释放出花粉粒，盖上盖玻 2 片，在显微镜下观察。 凡是被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒， 呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。观察2 ～3张片子，每 片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉 的活力。 2.氯化三苯基四氮唑（TTC ）法 （1 ）原理： 具有活力的花粉呼吸作用较强，其产生的 NADH 或NADPH 可将无色的TTC （2,3,5-氯化三苯基 2 2 四氮唑）还原成