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使用Agilent 1260 Infinity 生物惰性四 元液相色谱系统分析磷酸酯化合物 应用简报 生物制药 作者 Sonja Schneider 安捷伦科技公司 德国瓦尔德布隆 摘要 本应用简报展示了使用Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统，能够完全消除 分析三磷酸腺苷时不期望的保留和峰拖尾。因为Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相 色谱系统的流路设计中未采用铁质或钢质材料，所以在对磷酸酯化合物进行分析时，不 会像不锈钢系统那样出现形成磷酸酯铁络合物的问题。即使在高有机流动相的情况下， - 也观测到了良好的峰形，而未出现峰拖尾或峰面积减小的情况。 前言 实验部分 溶剂和样品 缓冲液 ： 乙酸铵 A 10 mM 在高效液相色谱分析中，已有关于磷酸酯 本实验所使用的 Agilent 1260 Infinity 四 1, 2 缓冲液B ： 10 mM 乙酸铵+ 10% 甲醇 化合物严重峰拖尾现象的详尽报导 。根 元液相色谱系统包括以下模块： 据报导，在不同的高效液相色谱分离技术 • Agilent 1260 Infinity 四元泵(G1311B) 缓冲液C ： 10 mM 乙酸铵+ 50% 甲醇 中，多种腺苷和胍的一、二、三磷酸核苷 酸以及其它磷酸酯化合物均出现了这种情 • Agilent 1260 Infinity 标准型自动进样 缓冲液D ： 10 mM 乙酸铵+ 70% 甲醇 3, 4 器(G1329B) 况 。 等人发现不锈钢和磷酸酯基团 Liu 缓冲液E ： 10 mM 乙酸铵+ 90% 甲醇 之间存在相互作用，从而形成磷酸肽 铁 - • Agilent 1290 Infinity 恒温器(G1330B) 5 (III) 络合物 。使用聚醚醚酮(PEEK) 管线 样品 1 • Agilent 1290 Infinity 柱温箱(G1316C) 取代不锈钢管线，可减少峰拖尾现象 。 三磷酸腺苷(ATP)，溶解于H O (5 mg/mL)